tlr9nf-κb信号通路对胃癌转移的影响

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1、分类号：R4单位代码：10752密级：公开学号：2010153宁夏医科大学硕士研究生学位论文TLR9/NF-B信号通路对胃癌转移的影响TheeffectofTLR9/NF-κBsignalingpathwayonthegastriccancermetastasis学位申请人：李锐指导教师：李秀萍教授合作指导教师：张艳丽副教授申请学位门类级别：医学专业名称：临床检验诊断学研究方向：肿瘤免疫所在学院：检验学院论文完成日期：二〇一三年四月宁夏医科大学研究生院NingxiaMedicalUniversityThesisforApp

2、licationofMaster’sDegreeTheeffectofTLR9/NF-κBsignalingpathwayonthegastriccancermetastasisStudent’sName:LiRuiSupervisor：LiXiupingProfessorAssistantsupervisor:ZhangYanliAssociateProfessorSubjectCategory:MedicineMajor:ClinicalLaboratoryDiagnosticsSpecialty:TumorImmuni

3、tyCollege:InstituteofLaboratoryMedicineCompletionDate:April.2013宁夏医科大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，无抄袭及编造行为。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日年月日宁夏医科大

4、学关于学位论文使用授权的声明宁夏医科大学有权保留使用本人学位论文，同意学校按规定向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权宁夏医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。可以公布（包括刊登）论文的全部或部分内容。（保密论文在解密后应遵守此规定）论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日年月日宁夏医科大学硕士研究生学位论文中文摘要TLR9/NF-B信号通路对胃癌转移的影响摘要目的本研究以体外培养的胃癌细胞MGC803

5、和移植瘤小鼠为研究对象，观察TLR9在胃癌细胞和裸鼠移植瘤组织中的表达。同时，利用TLR9的非特异性抑制剂氯喹（chloroquine,CQ）对TLR9/NF-κB信号通路进行干预，观察TLR9/NF-κB信号通路在胃癌细胞MGC803增殖、迁移以及对IL-6分泌的影响，以及与胃癌发生发展和转移相关的细胞因子：基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinase,MMP)和环氧合酶-2(cyclo-oxygenase-2,COX-2)mRNA表达情况，探讨TLR9的表达及其介导的NF-κB信号通路在胃癌发生及进展中

6、的作用机制，为胃癌建立新的、有效的临床免疫治疗提供理论和实验依据。方法（1）体外培养胃癌细胞MGC803，免疫荧光法检测TLR9在胃癌细胞MGC803中的表达。（2）CCK-8法测定TLR9抑制剂CQ对MGC803细胞增殖活性的影响。（3）ELISA方法观察TLR9抑制剂CQ在不同时间段对MGC803细胞释放IL-6的影响。（4）采用细胞划痕法检测TLR9抑制剂CQ对MGC803细胞迁移能力的影响。（5）运用RT-PCR的方法检测不同浓度TLR9抑制剂CQ作用胃癌细胞MGC803一段时间后对COX-2，MMP-2，MMP-7

7、以及NF-κBp65mRNA表达的影响。（6）建立胃癌的移植瘤裸鼠模型，观察TLR9抑制剂CQ对肿瘤大小及肿瘤转移的影响。（7）解剖移植瘤裸鼠脾脏与肿瘤组织，计算裸鼠的脾指数，观察免疫系统的变化。（8）应用免疫组化的方法观察TLR9抑制剂CQ对肿瘤组织TLR9的表达及组织结构的影响。结果（1）胃癌细胞MGC803上有TLR9的表达，并且主要表达在细胞浆。（2）-1-1-150μg·mL、100μg·mL、200μg·mL的CQ均能抑制胃癌细胞MGC803的增殖，且呈时-1间和浓度依赖性（p<0.05）。（3）200μg·mL

8、的CQ分别作用MGC803细胞24h，48h-1-1和72h后均可抑制IL-6的表达，而50μg·mL和100μg·mL的CQ仅在作用MGC803细胞72h后方可抑制IL-6的表达，且差异具有显著性（p<0.05）。（4）TLR9/NF-κB信I宁夏医科大学硕士研究生学位论文中文摘要号通路