trkb-bdnf信号传导通路对神经母细胞瘤细胞耐药和转移的影响

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1、TrlcB—BDNF信号传导通路对神经母细胞瘤细胞耐药和转移的影响摘要目的TrKB～BDNF信号传导通路与神经母细胞瘤(Neuroblastoma，NB)细胞的化疗耐药和转移密切相关。本研究探讨阻断TrkB-BDNF信号传导通路的三条下游信号传导通路后，NB细胞SH-SY5Y对化疗药物顺铂的敏感性及分泌基质金属蛋白酶一9(matrixmetalloproteinase一9，UP一9)的影响。方法常规培养SH—SY5YNB细胞，用纳摩尔浓度全反式维甲酸(A1l-transRetinoicAcid，ATRA)诱导酪氨酸激酶受体B(Tyr

2、osinekinasereceptorB，TrkB)高表达，加入脑源性神经营养因子(Brain—derivedneurotrophicfactor，BDNF)，从而激活TrkB-BDNF信号传导通路。用磷脂酰肌醇一3激酶(P13K)抑制剂LY294002、磷脂酶C(PLC)抑制剂U73122、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂U0126阻断该信号通路的相应下游信号传导通路后，加入化疗药顺铂(CDDP)。四甲基偶氮蓝比色(MTT)实验方法检测应用三种抑制荆前后细胞的存活率的变化；流式细胞仪(FCM)检测应用三种抑制剂前后细胞凋亡率的

3、变化。酶联免疫吸附测定(ELISA)技术检测全反式维甲酸(ATRA)诱导下酪氨酸激酶受体B(TrkB)、脑源性神经营养因子(BDNF)水平SH—SY5Y细胞培养上清中MMP一9含量及应用三种抑制剂前后SH-SYSY细胞培养上清中MMP一9含量的变化。结果ATRA+BDNF+CDDP组NB细胞的存活率及凋亡率与对照组相比，差异无显著性(P>O．05)。ATRA+BDNF+LY294002+CDDP组细胞对顺铂的敏感性增加，细胞的存活率明显降低，凋亡率明显升高，与ATRA+BDNF+CDDP组相比，差异有显著性(P

4、A+BDNF+U73122+CDDP组、ATRA+BDNP+U0126+CDDP组细胞对顺铂的敏感性降低，细胞的存活率明显升高，凋亡率明显降低，与ATRA+即NF+CDDP组相比，差异无显著性(胗O．05)。ELISA结果显示，lOnmol／LATRA组、lOOnmol／LATRA组MMP一9含量明显高于对照组(PO．05)；50ng／ml、IOOng／mlBDNF组mlP-9含量均明

5、显高于对照组(p0．05)；ATRA+BDNF组姗P一9＼一删含量明显高于对照组及ATRA组(尸O．05)。ATRA+BDNF+U0

6、126组MMP一9含量明显高于对照组及ATRA组(P0．05)。结论激活TrkB-BDNF信号传导通路可增强NB细胞耐药及促进其合成、分泌删P一9。SH-SY5Y细胞合成、分泌MMP-9受TrkB表达水平及BDNF浓度的影响。TrkB—BDNF信号传导通路可能通过进一步激活其下游P13K／Akt通路增强耐药及促进NB细胞合成、分泌tⅧVlP-9，用LY294002阻断P13K／Akt通路后可逆转耐药及抑制NB细胞合成、分泌砌IP-9，从而抑制NB的侵袭、转移。硕士研究生刘建英(JL

7、科学)指导教师李爱敏教授关键词：神经母细胞瘤；TrkB-BDNF信号传导通路；LY2940021耐药；基质金属蛋白酶一9EffectsoftheTrKB—BDNFsignalpathwayoRthechemoresistaneeandmetastasisofneuroblastomacellsAbstractObjectiveTrkB—BDNFsignalpathwayishighlyassociated谢tllthechemoresistanceandmetastasisofneuroblastoma(NB)cells．Inthi

8、sstudy,wedescribedthechangesofthesensibilityofNBSH-SY5Ycellstochemotherapydrugcisplatin(CDDP)andthesynthesisandsecret