基于rnai技术及功能分类基因芯片探讨survivin基因对人肺癌细胞侵袭的作用及机制

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1、分类号UDC编号!Q2璺9』Q墨1垒QQ3@江蒜大擎硕士学位论文基于RNAi技术及功能分类基因芯片探讨survivin基因对人肺癌细胞侵袭的作用及机制指导教师焦志垩作者姓名绘丞生申请学位级别亟±学科(专业)!隆废检验途逝堂论文提交日期学位授予单位和日期二。一三年四月评阅人ClassifiedIndex：UDC：Jiang：Universit,langsunlversltyMASTER，SDISSERTATIONEFFECTSANDMECHANISMOFSURVIVINGENEONINVASIONBYCoMBINBINGRNAI

2、TECHNOLOGYWITHFUNCTIONALCLASSIFICATIoNGENECHIPOFHUMANLUNGCANCERCELLS姓April2013独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已注明引用的内容以外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使

3、用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权江苏大学可以将本学位论文的全部内容或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密口，在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密口。学位论文作者签名：艚撕虢埤年月日年月日课题支撑本课题受以下项目支持：1，基于RNAi技术及蛋白组学方法探讨survivin基因对人肺癌细胞侵袭的作用及机制．江苏大学临床科研基金(ⅡY2010161)江苏人学硕士学位论文摘要背景：肺癌是我国发病率

4、最快的恶性肿瘤之一，癌细胞侵袭转移与患者不良预后密切相关。从分子水平深入探讨肺癌细胞侵袭转移相关机制，将可能有助于肺癌综合治疗。目的：了解Survivin基因在不同肺癌细胞中mRNA表达水平；survivin基因siRNA，转染肺癌细胞株，观察对肺癌侵袭和迁移的影响；借助于功能分类(转移)基因芯片，从基因水平探讨survivin基因调控肺癌细胞侵袭和迁移的分子机制。方法：应用荧光实时定量RT—PCR方法筛选survivin基因在不同肺癌细胞系中的mRNA水平水平；选择survivin表达最高细胞株，通过脂质体转染法，将surv

5、ivin基因siRNA转染肺癌细胞后，分别采用荧光实时定量RT．PCR和WesternBlot检测survivin基因mRNA和蛋白水平。采用软琼脂集落培养试验检测锚着不依赖性增殖性，采用Transwell方法检测癌细胞的侵袭能力。其次，收集转染48h的癌细胞，采用包含有88个转移相关基因芯片检测基因表达情况。结果：survivin基因在肺癌A549细胞株中mRNA水平最高。以survivin基因siRNA转染A549细胞后，转染组癌细胞survivinmRNA和蛋白水平明显被抑制，且与时间和浓度相关(火O．005，P<0．0

6、05)。与对照组比较，转染组细胞穿膜细胞数明显减少，且呈浓度依赖性(胗O．05)。与对照组比较，软琼脂集落形成数明显减少(P

7、分子机制。【关键词】肺肿瘤；survivin；侵袭；RNA干扰；小干扰RNA；功能分类基因芯片江苏火学硕士学位论文ABSTRACT[Abstract]ObjectiveToexploretheeffectsandmechanismofsurvivingeneonInvasionbycombinbingRNAinterencetechnologywithfunctionalclassificationgenechipofhumanlungcancercells．MethodsRealtimeRT—PCRwasusedtoeval

8、uatethesurvivinmRNAoffourhumanlungcancercelllines．ThecelllineofsurvivinhighestexpressionwastransfectedwithdifferentdoseofsurvivinsiRNA．The