利多卡因治疗特应性皮炎的机制研究

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1、上海交通大学博士学位论文利多卡因治疗特应性皮炎的机制研究作者姓名：指导教师：学科专业：答辩日期：学号：焦晴晴姚志荣皮肤病与性病学2013年5月01072291742013年4月利多卡因治疗特应性皮炎的机制研究作者姓名：焦晴晴指导教师：姚志荣学科专业：皮肤病与性病学研究方向：特应性皮炎申请学位：博士关键词：利多卡因，特应性皮炎，金黄色葡萄球菌肠毒素A，金黄色葡萄球菌肠毒素B，外周血单个核细胞，激活，角质形成细胞，中间丝相关蛋白，抗茵肽，皮肤屏障功能上海交通大学医学院附属新华医院2013年4月上海交通大学博士论文上海交通大学学位论文

2、原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：弘／>年岁月IIII嗡啊上海交通大学博士论文上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权

3、上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密口，在一年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密彤(请在以上方框内打“√")IV指导教师签日期：。弘／嘲Lr咳，“日，、燮多八型g：-rTj轹一汨捌岁作衫史h论：l业朝tlk七岁学日上海交通大学博士论文利多卡因治疗特应性皮炎的机制研究摘要背景：特应性皮炎(atopicdermatitis，AD)是一种炎症性的、慢性复发性、瘙痒性皮肤病。AD患者皮损处常出现金黄色葡萄球菌定植，其中定植于AD患者皮损表面

4、30．60％金葡茵菌株可以释放金黄色葡萄球菌外毒素超抗原(StaphylococcalenterotoxinA，SEA和StaphylococcalenterotoxinB，SEB)。金黄色葡萄球菌外毒素对外周血来源的单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcell，PBMCs)尤其是其中的T细胞的激活在AD的发病机制中发挥了关键作用，前期有研究发现，利多卡因可以明显减弱外来变应原诱导的哮喘患者PBMCs的增值和部分细胞因子的释放；另外，跟皮肤屏障功能相关的中间丝相关蛋白(filaggrin，FLG)和抗

5、菌肽(humanbeta-defesins，HBDs)在AD患者皮内表达严重缺失。目前，临床上常用的类固醇类药物治疗AD由于其给皮肤屏障功能带来的副作用，正被受到质疑，我科在临床上使用的利多卡因静脉封闭治疗AD，具有疗效可靠、价格低廉、停用没有明确的“反跳"现象等优点，但因作用机制尚不清，限制了它的广泛使用，因此对其治疗AD的机制进行探索，将有助于更加准确地使用这一悠久而又低廉的治疗方法，为广大患者服务。目的：通过研究利多卡因对SEA或SEB刺激激活的AD患者PBMCs的影响，SEA和SEB是否可以直接抑制FLG和HBDs的表达

6、，利多卡因对SEA、SEB和TH2型的细胞因子调控的FLG和HBDs表达的影响和相关机制，以及利多卡因静脉封闭治疗对AD患者皮损处FLG表达的影响，探索利多卡因治疗AD的相关机制。V上海交通大学博士论文方法：抽取10例AD患者外周血，常规分离培养PBMCs，分别以SEA或SEB刺激共孵育，同时加入不同浓度的利多卡因，随后采用3H．TdR掺入法检测PBMCs的增值，酶联免疫吸附剂测定(EnzymeLinkedImmunoSorbentAssay，ELISA)检测部分THl和TH2型细胞因子的释放，检测利多卡因是否可以抑制SEA或S

7、EB对AD患者PBMCs的激活；实时聚合酶链式反应(RealtimePCR，RT-PCR)和蛋白质印迹分析(WesternBlotanalysis，WB)分别检测利多卡因对与SEA和SEB激活的AD患者PBMCs共孵育的人角质形成细胞株HaCaT细胞内FLGmRNA和蛋白表达的影响，以此验证利多卡因是否可以抑制金葡菌超抗原SEA和SEB对AD患者PBMCs的激活。以不同浓度的SEA或SEB刺激HaCaT细胞或原代人表皮角质形成细胞(Normalhumankeratinocytes，NHK)，通过改变培养环境中Ca2+浓度调节其分

8、化，分别采用RT-PCR、Westernblot、ELISA或者免疫荧光染色技术(immunofluorescencestaining)检测SEA或SEB对分化的角质形成细胞(keratinocytes，KCs)内FLG和HBDs的表达的影响，经SEA或SEB刺