促肾上腺皮质激素和转化生长因子β1对足细胞表型影响

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2、粤《：日期：P??』÷：兰竺鲰日期．掣?!哆!兰竺：促肾上腺皮质激素‘j转化生长因子131对足细胞表型的影响中文摘要促肾上腺皮质激素与转化生长因子p1对足细胞表型的影响中文摘要目的：分别观察促肾上腺皮质激素(ACTHl埘和ACTI-14-10)和转化生长因子D1(TGF．B1)对正常足细胞裂孔膜蛋白分子podocin核酸水平，纤维连接蛋白(fibronectin，FN)和平滑肌肌动蛋白(a．smoothmuscleactin，a—SMA)蛋白水平的影响，以期能够探讨ACTHl．24和ACTH4-10对肾脏足细胞表型的影响以及预防性保护机制，并

3、明确在预防性保护TGF．p1对正常肾脏足细胞的损伤方面，ACTHl-24和ACTH4．10发挥的作用是否相似。方法：1．细胞培养：根据文献【l】将复苏的条件永生型小鼠足细胞系MPC5细胞，于33℃中增殖培养，平均3．--,4d达80％以上融合传代，更换于37"C中培养，平均10,-一14d分化为成熟，此时为分化态MPC5，观察正常状态下足细胞的形态，细胞状态良好时可以用于实验；将细胞接种于六孔板，试验前用无血清RPMI1640培养液调整细胞生长状态，使细胞同步化。2．细胞分组：将细胞分为ACTHl-24预防实验组和ACTH4-lo预防实验组，

4、ACTHl埘处理组和ACTlklo处理组又分别分为A，B两组，A组：预先加入ACTHI．24(9戈ACTH4．10)处理1h，后加入TGF．p1处理24h；B组：预先加入ACTHb24(或ACTH4．10)处理1h，后加入TGF．p1处理48h。根据文献【2，31，ACTHl-24分别设低浓度(75ng／m1)、中浓度(150ng／m1)、高浓度(300ng／m1)三种浓度刺激足细胞；ACTH4．10亦分别设低浓度(1ng／m1)、中浓度(10ng／m1)、高浓度(100ng／m1)三种浓度刺激足细胞；根据文献[4】，选取2ng／tm为TGF

5、—pl处理足细胞浓度，刺激时间为24h与48h。3．检测指标：足细胞裂孔膜蛋白分子podocinmRNA表达水平，纤维连接蛋白(FN)和平滑肌肌动蛋白(a．SMA)蛋白表达水平。结果：ACTHl．24预防实验组：与对照组相比，TGF—pl处理组的podocin的核酸表达水平明显降低，降低约54．9％；FN的蛋白表达水平明显升高，升高约2．3倍；a．SMA的蛋白表达水平明显升高，升高约2．4倍。与对照组相比，ACTHl-24处理组的podocin的核酸表达水平升高，升高约7．5％；FN的蛋白表达水平降低，降低约0．1％；a．SMA中文摘要促肾上

6、腺皮质激素与转化生长囡子母1对足细胞表型的影嘀的蛋白表达水平升高，升高约1．7％。与对照组相比，ACTHl-24低、中、高三种浓度与TGF—B1处理组podocin的核酸表达水平呈现上升趋势，分别升高1．3倍、2．4倍、1．2倍；而与TGF．D1处理组相比，FN的蛋白表达水平呈现下降趋势，分别下降0．1％、7．3％、40．1％：与TGF—Dl处理组相比，ACTHl．24低、中浓度与TGF．Dl处理组a．SMA的蛋白表达水平呈现上升趋势，分别升高约4．5％，11．8％；ACTHl．24高浓度与TGF．D1处理组Q．SMA的蛋白表达水平降低，降低

7、约22．4％。ACTH4．10预防实验组：与对照组相比，TGF．p1处理组的podocin的核酸表达水平明显降低，降低约57．9％；FN的蛋白表达水平明显升高，升高约18．6倍；a．SMA的蛋白表达水平明显升高，升高约90．6％。与对照组相比，ACTH4．10处理组的podocin的核酸表达水平升高，升高约8．3％；FN的蛋白表达水平升高，升高约4．8％；a．SMA的蛋白表达水平升高，升高约28，9％。与对照组相比，ACT瞰lo低、中、高三种浓度与TGF．p1处理组podocin的核酸表达水平呈现上升趋势，分别升高5．5％，64．3％，1．7

8、倍；而与TGF，p1处理组相比，ACTH4_10低、中浓度与TGF—pl处理组FN的蛋白表达水平呈现上升趋势，分别升高约8．8％，9，2％；ACTH4-10高浓度与