脊髓灰质炎病毒株假病毒颗粒的研究和适用

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1、理学硕士学位论文脊髓灰质炎病毒株假病毒颗粒的研究和适用STUDIESANDAPPLICATIONSOFARMOREDRNAOFPOLIO-VIRUS乔梦伟哈尔滨工业大学2015年6月国内图书分类号：Q344学校代码：10213国际图书分类号：577.21密级：公开理学硕士学位论文脊髓灰质炎病毒株假病毒颗粒的研究和适用硕士研究生：乔梦伟导师：宋金柱教授申请学位：理学硕士学科：生物学所在单位：生命科学与技术学院答辩日期：2015年6月授予学位单位：哈尔滨工业大学ClassifiedIndex:Q344U.D.C:577.21Dissertationforth

2、eMasterDegreeinBiologySTUDIESANDAPPLICATIONSOFARMOREDRNAOFPOLIO-VIRUSCandidate：QiaoMengweiSupervisor：Prof.SongJinzhuAcademicDegreeAppliedfor：MasterofBiologySpeciality：BiologyAffiliation：SchoolofLifeScienceandTechnologyDateofDefence：June,2015Degree-Conferring-Institution：HarbinIns

3、tituteofTechnology哈尔滨工业大学理学硕士学位论文摘要脊髓灰质炎病毒（简称脊灰病毒）感染可引起急性肠道传染病脊髓灰质炎（简称脊灰），其主要病状为肢体麻痹、下肢发育不全和功能障碍，并造成终身残疾。脊髓灰质炎减毒活疫苗（OralPolioVaccine,OPV）和脊髓灰质炎灭活苗(InactivePolioVaccine,IPV)是主要的流行病学预防手段。但是，在使用OPV的国家发现了罕见的疫苗相关麻痹型脊灰和疫苗衍生脊灰病毒病例，这提示我们进一步加强对疫苗生产的质量控制力度十分必要，准确排查疑似脊灰患者的手段仍需加强。本研究旨在构建三型脊髓

4、灰质炎病毒株（sabinI型、sabinII型和sabinIII型）的假病毒颗粒ArmoredRNA-sabI、ArmoredRNA-sabII和ArmoredRNA-sabIII，并以构建得到的假病毒颗粒作为实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）的阳性标准品，实现对待测样本中脊髓灰质炎病毒拷贝数的测定。本研究中使用PAR工程质粒作为载体，分别连接脊髓灰质炎病毒株sabinI型、sabinII型和sabinIII型的特异基因片段sabI、sabII、sabIII，得到的重组质粒转化后筛选阳性克隆。经鉴定的重组菌株在LB培养基中振荡培养、诱导后富集菌

5、体，然后进行裂解和核酸酶处理，制备假病毒颗粒ArmoredRNA-sabI、ArmoredRNA-sabII和ArmoredRNA-sabIII的粗提液。假病毒颗粒粗提液经核酸水平和蛋白质水平检测后，用来制作qRT-PCR标准曲线的标准品发挥其适用功能。关键词：假病毒颗粒；脊髓灰质炎病毒；实时荧光定量聚合酶链式反应；标准品I哈尔滨工业大学理学硕士学位论文AbstractTheinfectionofpolio-viruscancauseacuteintestinalinfectiousdisease,withthemainsymptomsincluding

6、acuteflaccidparalysis,lowerlimbhypoplasiaanddysfunction,evenpermanentdisability.ThemainpreventivemethodinepidemiologyistheuseofOralPolioVaccine(OPV)andInactivePolioVaccine(IPV).However,theVaccineassociatedparalyticpoliomyelitis(VAPP)andvaccine-derivedpolioviruses(VDPV)arefoundint

7、hecountrieswhichareusingOPV,suggestingthecontrolofthevaccinequalityrequiretobeimproved,soisthemethodinrapidscreeningthesuspectedpoliocases.ThisstudyaimstobuildthreetypesofarmoredRNAs,ArmoredRNA-sabI,ArmoredRNA-sabIIandArmoredRNA-sabIII,andtosetthearmoredRNAsasapositivecontrolinth

8、ereal-timefluorescentquantitativepolymer