smac基因过表达联合天花粉蛋白对caski细胞凋亡的影响及其相关机制的研究

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1、分类号R71密级公开UDC610硕士学位论文Smac基因过表达联合天花粉蛋白对Caski细胞凋亡的影响及其相关机制的研究学位申请人：刘瑞雪学科专业：妇产科学指导教师：黄利鸣教授王艳林教授二○一三年三月ADissertationSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineOver-expressionofSmacGeneIncreasedSensitivityofHumanCaskiCervica

2、lCancerCellstoTrichosanthinandrelatedmechanismsGraduateStudent:LiuRuixueMajor:ObstetricsandGynecologySupervisor:Prof.HuangLimingProf.WangYanlinChinaThreeGorgesUniversityYichang,443002,P.R.ChinaMarch,2013三峡大学硕士学位论文三峡大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，

3、独立进行研究工作所取得的成果，除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体均已在文中以明确方式标明，本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。学位论文作者签名：日期：三峡大学研究生知识产权承诺书本人承认：我作为三峡大学硕士研究生在校学习期间，在导师指导下，依据研究工作所作学位论文的知识产权全部权归三峡大学所有。本人承诺：我有义务维护三峡大学的知识产权，凡是以我本人学位论文内的全部或部分研究成果，或实验数据为基础所形成的研究论文

4、及成果，无论是以何种形式刊发学术论文、进行成果鉴定或申报奖励，均以三峡大学为第一作者单位或完成单位，并事先征得导师或学校相关部门的同意。我愿承担因违背上述承诺而引起的一切法津和经济后果。学位论文作者签名：日期：I三峡大学硕士学位论文内容摘要目的：本研究主要探讨Smac基因过表达联合天花粉蛋白（TCS）处理对人宫颈癌Caski细胞凋亡的影响及其相关机制。方法：Westernblot法鉴定TCS对人宫颈癌Caski细胞Smac蛋白水平表达的影响；构建真核表达质粒pcDNA3.1(-)/Smac，将该质粒稳

5、定转染入宫颈癌Caski细胞后，RT-PCT和Westernblot法分别在mRNA和蛋白水平上的鉴定筛选得到的Smac高表达的细胞Caski/Smac；MTT法观察Smac高表达对Caski细胞生长及对TCS敏感性的影响；流式细胞仪分析TCS对Caski细胞凋亡的影响；Westernblot法分析TCS对Caski细胞凋亡相关因子cyt-c的表达影响。结果：①TCS能诱导Caski细胞内Smac基因表达，且呈时间与浓度依耐性；②成功获得Smac基因高表达的细胞株Caski/Smac；③Smac高表达

6、使Caski细胞生长速度明显减慢（P<0.01），且对TCS的敏感性显著性增加（P<0.01）；④TCS作用于Caski细胞可诱发其凋亡，但Smac高表达的细胞凋亡更为明显，差异具有显著性（P<0.01）。结论：Smac基因过表达能增加Caski细胞对TCS的敏感性，在同等药物浓度下能更明显抑制细胞增殖和促进其凋亡。此外，TCS也能够诱导细胞中Smac基因表达，这可能是其促细胞凋亡的机制之一。关键词：Smac/DIABLO，宫颈癌细胞，天花粉蛋白，药物敏感性，基因II三峡大学硕士学位论文Abstrac

7、tObjectiveToinvestigatetheeffectsofSmacover-expressiononthesensitivityofhumancervicalcarcinomaCaskicellstotrichosanthin(TCS)anditsunderlyingmechanism..MethodsWesternblotassaywereusedtodetectexpressionlevelofSmacgeneinthehumanCaskicellslineafterTCStreatm

8、ent.TheeukaryoticexpressionplasmidpcDNA3.1(-)/SmacwasconstructedandstablytransfectedintotheCaskicells.AndthenRT-PCTandwesternblotwereusedtoselectthecelllinewithSmacover-expressioninmRNAandproteinlevels.MTTmethodwasusedtodetermine