不同剂量的天花粉蛋白对caski细胞凋亡的影响论文

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1、不同剂量的天花粉蛋白对Caski细胞凋亡的影响论文张艳琼，黄利鸣，李红军，吴江锋【摘要】目的探讨天花粉蛋白(TCS)对人宫颈癌Caski细胞生长的抑制作用及量-效关系。方法不同浓度TCS作用于体外培养人宫颈癌Caski细胞株，采用吖啶橙荧光染色，荧光显微镜观察TCS对Caski细胞的生长抑制作用；透射电镜和TUNEL检测法观察Caski细胞凋亡及TCS诱导Caski细胞凋亡的量效关系。结果TCS对Caski细胞的生长具有明显的抑制作用，透射电镜和TUNEL法证实该抑制作用是通过诱导细胞凋亡实现的。在一定浓度范围内，细胞凋亡数与TC

2、S的浓度之间有剂量依赖性。结论TCS能诱导体外培养Caski细胞凋亡.freell。【关键词】天花粉蛋白；Caski细胞；细胞凋亡Abstract:ObjectiveTostudytheinhibitoryeffectofdifferentdosetrichosanthin(TCS)onCaskicells.MethodsTheantiproliferativeeffectofdifferentdoseTCSonCaskicellsicroscope.TheTUNELassayandelectromicroscopeeasurem

3、entofapoptosisofdifferentdoseTCSonTheCaski.ResultsTheapoptosisofdifferentdoseTCSonCaskiCellsactedastheantiproliferation.ThequantityoftheapoptosisoftheCaskicellsdependedonTCS'dosel.Key的块根中提取的一种单链核糖体失活蛋白(ribosome-inactivatingprotein，RIP)，迄今的研究发现TCS具有抗绒毛膜上皮癌、胃肠道肿瘤、白血病和子宫

4、颈腺癌等恶性肿瘤作用［1,2］。本实验旨在研究TCS对人子宫颈磷癌细胞的作用，并探讨其量-效关系，为TCS在抗宫颈癌的临床应用提供实验依据。1材料与仪器TCS购自上海金山制药厂（1.2mg/ml）；RPMI-1640培养基购自Gibcol公司；10%新生牛血清购自杭州四季青公司；吖啶橙购自Sigma公司；DNaseI购自上海博亚生物技术有限公司；TritonX-100购自华美生物工程公司；DAB试剂盒购自北京中山生物技术有限公司；TUNEL试剂盒购自Roche公司；倒置显微镜和多功能显微镜及图像分析系统购自德国Leica；H-75

5、00型透射电镜购自日立。2方法2.1细胞培养人子宫颈鳞癌Caski细胞株(中国协和医科大学基础研究所生物物理教研室馈赠)，培养于5%CO2，37℃湿化孵箱中。培养基RPMI-1640中含10%新生牛血清，0.1U/L青霉素，0.1U/L链霉素，所有实验均取对数生长期细胞。2.2倒置和荧光显微镜观察细胞的形态学变化体外培养的Caski细胞用PBS处理为阴性对照组、实验组分别用不同浓度（20,40，60，80，100μg/ml）TCS处理24h和48h后，加入0.01%吖啶橙磷酸缓冲液（pH6.0）50μl，轻轻混匀，静置2min后，

6、于荧光显微镜下观察并记录图像。2.3透射电子显微镜观察实验组以60μg/ml的TCS处理Caski细胞24h和48h，PBS处理为阴性对照组。2.5%戊二醛固定、包埋、超薄切片，醋酸双氧铀和枸橼酸钠硝酸铅双重染色后，倒置电镜下观察并拍照。2.4脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测实验组用不同浓度（20,40,60,80,100μg/ml）TCS处理Caski细胞24h。按TUNEL试剂盒说明操作。用DNaseⅠ处理Caski为阳性对照，试剂2替代TUNEL反应混合溶液为阴性对照。凋亡细胞的判断：胞核棕黄色

7、染色为阳性，阴性细胞不显色。2.5图像分析软件定量分析每一玻片任选10个视野，计算在200倍光镜下检测凋亡阳性细胞的个数、平均面积和平均灰度［3］。数据统计学分析用SPSS10.0统计软件（t检验）。3结果3.1倒置显微镜下观察对照组细胞呈梭形，贴壁牢固、密集，折光性好，胞质饱满；实验组中经20μg/mlTCS作用48h后细胞间隔增大,细胞体积缩小，胞浆凝缩，折光率增强，贴壁性差；60μg/mlTCS浓度作用48h脱落细胞数增加,细胞表面出现发泡现象；TCS药物浓度达到100μg/ml作用24h后即出现上述特征。3.2荧光显微镜下

8、观察经吖啶橙荧光染色后，长链的DNA在荧光显微镜592nm波长紫外线激发下发出绿色荧光，而RNA发出黄色或黄绿色荧光。本实验的阴性对照组的细胞核DNA为绿色均匀荧光（图1）；各实验组均可见到凋亡的细胞：细胞膜完整，细胞核或细胞质可见致密浓染的黄色荧