α-synuclein a53t转基因帕金森小鼠模型dna甲基化研究

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1、中图分类号基Z垒UDC610博士学位论文学校代码lQ墨三3密级公珏仅一synucleinA53T转基因帕金森小鼠模型DNA甲基化研究DNAMethylationStudyinQ·synucleinA53TTransgenicPDMouseModel作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：副指导教师：宋承远临床医学神经病学湘雅医院唐北沙教授郭纪锋博士论文答辩日期丝!兰：鱼兰答辩委员会主中南大学2013年6月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢

2、的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：日期：盟年』月土日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定5即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提

3、供信息服务。八年制博士学位论文中文摘要伍．synucleinA53T转基因帕金森小鼠模型DNA甲基化研究摘要帕金森病(Parkinson’Sdisease，PD)，又叫震颤麻痹(paralysisagitans)，是中老年人群中一种常见的神经系统变性疾病，随着人口的老龄化，其发病率呈逐渐上升趋势，大于65岁人群的发病率约为1％，成为继阿尔茨海默病之后的第二大退行性疾病。DNA甲基化是哺乳动物研究最深入的表观遗传学改变，它与疾病的关系已逐渐成为医学研究的新热点之一。研究发现，DNA甲基化水平异常在PD发病过程中起重要作用，但目前的研究多集中在检

4、测某一个或几个基因启动子区域甲基化改变，尚缺乏在全基因组水平上的甲基化改变研究。目的：探讨仅一synucleinA53T转基因PD小鼠模型基因组水平的甲基化改变，了解发生甲基化改变基因涉及的通路。寻找PD致病位点PARKl．18中哪些基因发生了甲基化改变，研究这些基因的转录水平改变。方法：解剖获得转基因PD小鼠模型和正常对照小鼠脑组织黑质，提取基因组DNA和RNA。利用DNA甲基化芯片(RocheNimbleg)从全基因组水平寻找存在甲基化差异的基因并进行基因通路分析；重亚硫酸盐测序(BisulfitePCRSequencing，BSP)技术

5、研究目的基因甲基化水平；实时荧光定量PCR(RT-PCR)研究目的基因的转录改变。结果：DNA甲基化芯片共比对了全基因组12535个基因的启动八年制博士学位论文中文摘要子区，两组小鼠存在甲基化水平差异的基因共有3572个，其中转基因组较对照组甲基化水平降低的基因有2031个，甲基化水平升高的有1541个。通路及聚类分析显示甲基化差异基因涉及的通路包括SNARE介导的囊泡转运，甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸代谢，内质网蛋白合成，P53信号通路，泛素蛋白酶通路，WNT信号通路，NOTCH信号通路等在内的二十余条信号通路。其中，SNARE介导的囊泡转运，泛

6、素蛋白酶通路，WNT信号通路与PD关系最密切。差异基因中，PARK5(Uchll)和PARKl5(Fbx07)启动子在转基因小鼠中甲基化水平明显下降，有统计学意义(Uchllp=0．012'；凡ⅨD7P=O．002*)。Uchll基因在转基因小鼠黑质部位表达明显升高(p=O．017')，Fbx07基因在两组小鼠黑质表达无明显差异(p=0．472)。结论：1．在国内外首次利用0【．synucleinA53T转基因小鼠PD模型进行DNA甲基化研究。a．synucleinA53T转基因小鼠PD模型黑质部位DNA存在甲基化修饰异常。异常基因涉及多条信

7、号通路2．证实甲基化免疫共沉淀技术结合DNA芯片技术(MeDIP．Chip)是在基因组水平上筛选存在甲基化修饰异常基因的有效方法。O【．synucleinA53T转基因小鼠PD模型黑质部位筛选出的PD相关甲基化修饰异常的基因可作为下一步研究的靶基因3．0【．synucleinA53T转基因小鼠PD模型黑质部位PARK5(Uchll)和PARKl5(FbxoT)基因存在低甲基化，且沈向J『，基因转录水平明显升高4．Uchll基因表达受启动子区CpG岛甲基化水平调控关键词：帕金森病；转基因小鼠；甲基化；甲基化芯片；Uchll；Fbx07分类号：R

8、744．7III八年制博士学位论文英文摘要DNAMethylationStudyin伐-synucleinA53TTransgenicPDAbstractMouse