5-aza-dc逆转非小细胞肺癌细胞顺铂耐药相关microrna的筛选鉴定

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1、中图分类号』丝4．2616八年制博士学位论文学校代码!Q三三三密级公珏5-Aza．dc逆转非小细胞肺癌细胞顺铂耐药相关microRNA的筛选鉴定TheexpressionandmechanismofmicroRNAsinreversaleffectof5-Aza··dcOilcisplatin·-resistanceinNSCLCcells作者姓学科专研究方学院(系、指导教论文答辩日期211：!乡卢敏临床医学肿瘤学湘雅二医院胡春宏教授答辩委员会主席垄磕中南大学二零一三年五月●●＼l，名业向所师原创性声明本人声明，所呈交的学位论文

2、是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均己在论文中作了明确的说明。，厶I作者签名：缴日期：——年一月一日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段

3、保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。摘要5．Aza．dc逆转非小细胞肺癌细胞顺铂耐药相关microRNA的筛选鉴定研究背景：顺铂是非小细胞肺癌(NSCLC)最主要的化疗药物，但易产生耐药性，如何改变NSCLC耐药性及耐药逆转机制研究是当前的热点之一。我们前期研究表明，5．氮．2’一脱氧胞苷(5一Aza-dc)可逆转NSCLC细胞的顺铂耐药性，但具体机制不明。最近研究显示，microRNA(miRNA)与肿瘤顺铂耐药相关，而5．Aza．dc可影

4、响肿瘤细胞的miRNA表达谱。因而我们推测：miRNA可能在5一Aza-dc诱导的NSCLC细胞顺铂耐药逆转中发挥重要调控作用。本实验通过检测5．Aza．dc诱导前后的耐顺铂细胞株A549／DDP细胞中miRNA表达谱变化，及预测分析miRNA的靶基因，探讨miRNA是否与5一Aza—dc诱导的NSCLC细胞顺铂耐药逆转相关，为深入研究5一Aza-dc逆转顺铂耐药的miRNA调控机制提供基础。研究目的：探讨miRNA是否与5．Aza—dc诱导的NSCLC细胞顺铂耐药逆转相关；初步筛选出调控5．Aza—dc逆转NSCLC细胞顺铂耐

5、药过程的相关miRNA及靶基因。研究方法：以MTT法检测A549／DDP细胞对顺铂的耐药指数及5-Aza-dc对A549／DDP细胞的耐药逆转作用。miRNA芯片技术检测5-Aza-dc诱导A549／DDP细胞后miRNA表达谱差异；quantitativereal．timePCR(RT-qPCR)验证芯片结果。生物信息学方法预测miRNA的靶基因，并对靶基因进行GO分析及KEGG信号通路分析。结果：1．A549细胞和A549／DDP细胞对顺铂的IC50分别为6．79士1．58“M，39．39士2．86州，耐药指数对为5．80，

6、该A549／DDP细胞鉴定为对顺铂耐药的肺癌细胞株。无毒剂量20州5-Aza-dc诱导后的A549／DDP细胞对顺铂的IC50下降为17．2l士3．13州，耐药逆转指数为2，29，20I，tM5一Aza—dc诱导对A549／DDP细胞有明显的耐药逆转作用。2．总RNA质检显示样本纯度高，完整性好，符合miRNA芯片要求。miRNA芯片结果显示经5一Aza．de诱导细胞后有131条差异表达的miRNA，其中43条miRNA(27条上调，16条下调)表达差异倍数在2倍以上，两个样品芯片杂交信号值均在100以上。RT-qPCR结果显示

7、与miRNA芯片结果趋势相似。3．生物信息学预测了miRNAjZllmiR-320a，let一7b，miR-548j的靶基因，并分析靶基因的生物学功能及相关信号通路，从中初步筛选出可能介导5-Aza-dc逆转NSCLC细胞顺铂耐药的相关靶基因，如BCL2L1，SMAD2，E2F3等，并分析得到靶基因相关的MAPK信号通路，Wnt信号通路，JAK／STAT信号通路，PPAR信号通路，凋亡相关通路，药物代谢等信号通路，提示miRNA可能通过影响这些通路活性参与调控5一Aza-dc诱导的NSCLC细胞顺铂耐药逆转。结论：miRNA可能

8、与5．Aza—dc诱导的NSCLC细胞顺铂耐药逆转相关，其机制可能是通过影响靶基因如BCL2L1，SMAD2，E2F3等的表达，进而调控NSCLC细胞的顺铂耐药逆转过程。图9幅，表12个，参考文献38篇关键词：miRNA；NSCLC；顺铂耐药；5-Aza-dc；