去甲斑蝥素丝素蛋白壳聚糖肝动脉缓释栓塞微球的制备与药效学研究

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1、SOOCHOWUNIVERSITY硕士学位论文论文题目去甲斑蝥素丝素蛋白/壳聚糖肝动脉缓释栓塞微球的制备与药效学研究研究生姓名张光宇指导教师姓名张学农专业名称药剂学研究方向药物新技术与新剂型论文提交日期2013年5月去甲斑蝥素丝素蛋白/壳聚糖肝动脉缓释栓塞微球的制备与药效学研究中文摘要中文摘要目的：本文以去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)为模型药物，包载入以生物材料丝素蛋白(silkfibroin，SF)及优良成形性材料壳聚糖(chitosan，CS)为载体的骨架微球中，制备了去甲斑蝥素丝素蛋白/壳聚糖肝动脉缓释栓塞微球(N

2、orcantharidinloadedsilkfibroin/chitosanmicrospheres,NCTD-SF/CS-MS)。建立了家兔肝癌模型并通过肝动脉化疗栓塞术(transcatheterarterialchemoembolization,TACE)治疗肝癌，用以考察微球药效学。以期达到缓释、靶向、栓塞三重功效，降低药物毒副作用，抑制肿瘤细胞生长和转移，探索临床治疗不可切除性肝癌新方法。方法：(1)采用乳化-固化法，制备去甲斑蝥素丝素蛋白/壳聚糖微球(NCTD-SF/CS-MS)。单因素考察包括壳聚糖浓度、转速、乳化剂加入量、戊

3、二醛用量等条件；并选定壳聚糖浓度、戊二醛用量、药载比三项为因素，载药量、包封率、收率三项为指标，采用星点设计-效应面法(centralcompositedesign,CCD)进行微球制备处方的优化与验证。(2)采用扫描电镜(SEM)观察微球的表面形态，光学显微镜计算平均粒径及粒径分布。采用红外光谱(FT-IR)、X-粉末衍射法(X-RD)和差示扫描量热法(DSC)验证载体及微球的结构特征。并对微球的粉体学性质、吸水膨胀性，悬浮性及导管推注实验进行考察。(3)体外释放采用体外动态透析法，在PBS7.4缓冲液中测定不同粒径载药微球的释药性能，以及

4、与实验组前期研究的去甲斑蝥素壳聚糖微球(NCTD-CS-MS)进行对比。同时考察微球的稳定性。(4)选用新西兰大白兔作为模型动物，采用超声引导下穿刺针法，于兔肝左叶植入VX2瘤块建立肝癌动物模型。B超监测肿瘤生长大小及速率，并用影像学手段及病理表现评估建模成功率。(5)将荷瘤兔随机分为5组，每组10只，分别为：NCTD-SF/CS-MS组(100~200/µm)、NCTD-CS-MS组(100~200/µm)、空白微球(blank-microsphere，B-MS)组(100~200/µm)、NCTD溶液组(NCTD)及空白对照组(Contr

5、olGroup)，含药-1各组药载量为1.0mg·kg。实验兔行肝动脉化疗栓塞术，注入制剂或药物，B超，CT，MR以及病理切片观察各组治疗效果以及TACE对肝功能的影响。结果：(1)单因素考察表明壳聚糖浓度，药载比对微球特性影响较大，而戊二醛用量对微球缓释性能影响较大。采用星点设计-效应面法优化工艺制备所得的微I中文摘要去甲斑蝥素丝素蛋白/壳聚糖肝动脉缓释栓塞微球的制备与药效学研究球包封率(27.80±1.25)%，载药量(15.08±2.85)%，收率(34.12±3.82)%，光镜法得出平均粒径为(184±5)μm，满足栓塞微球的要求。(

6、2)扫描电镜照片显示微球外观圆整，表面光滑，分散良好。FT-IR、X-RD和DSC图谱表明壳聚糖与丝素蛋白间产生较强分子间作用力，使结构紧密，去甲斑蝥素分散包埋在微球骨架中。粉体学性质考察结果符合要求，流动性好，吸水膨胀性实验结果满足膨胀要求。微球悬浮性好，不堵塞导管，推注顺利。(3)载药微球能够缓慢释放14天左右，释放速率符合威布尔模型；NCTD-SF/CS-MS缓释效果比NCTD-CS-MS好。微球稳定性良好，剧烈条件下重量、载药量和包封率差异均不是很大。(4)利用超声引导穿刺针种植操作方便，模型稳定。B超，CT和MR结果表明建模成功率为

7、87.5%。(5)综合肿瘤体积和生长速率，动物生命延长率以及病理结果显示，两种药物微球组相对于空白微球组、NCTD溶液组及空白对照组均有显著的治疗效果，其中NCTD-SF/CS-MS组动物生命延长率为41.66%，更优于较NCTD-CS-MS组的31.89%，病理切片显示大片凝固性坏死。DSA结果显示栓塞彻底，几乎没有侧枝循环。生化指标结果表明，给药组术后均呈现一过性的肝损伤，药物微球组损伤相对严重。结论：本文制备的NCTD-SF/CS-MS充分发挥了丝素蛋白的缓释作用，释放性能良好。制得的微球具有较好的载药量和包封率，表面光滑圆整，并且悬浮

8、性、流动性、稳定性、吸水膨胀性等也均达到栓塞微球的要求。药效学实验表明NCTD-SF/CS-MS经肝动脉栓塞对兔的VX2肝癌具有一定的治疗效果，疗效优于NCTD-C