微生物检验方法验证方案

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1、海量资料超值下载微生物限度检查方法验证方案①微生物限度检查检验方法验证报告⑩微生物检验方法验证方案15微生物限度检查方法验证方案编码：表一、验证方案的起草与批准1.验证方案起草起草人：起草时期：年月日2.验证小组成员：3.验证方案审核部门审核人日期生产部生产车间QCQA4.验证方案批准批准人：批准日期：二、验证方案1.验证目的和原理1.1验证目的为确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌、酵母菌数的测定，特制定本方案。验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需要变更时，应报验证委员会批准。1.2原理通过比较试验4组中试验菌的恢复生长结果来评

2、价整个检验方法的准确性、有效性和重现性。2.验证方法步骤2.1验证前的准备：进行微生物限度检查方法验证前，所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有影响。试验菌应包括G—、G+、酵母菌和霉菌类微生物以基本覆盖样品中可能存在的微生物。2.2验证试验的操作计划：用3个不同批号产品微生物限度检测方法进行平行试验，通过计算回收率来判断限度检查方法是否对产品有影响。⑰海量资料超值下载2.3试验结果可接受标准：用标准菌株评价方法“”的微生物限度检查对检品中微生物的抑制性，试验结果应显示3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率应不

3、小于70%，试验组回收率也不低于70%。3.试验实施3.1试验前的准备3.1.1主要仪器设备：恒温培养箱、生化培养箱、电子天平、高压蒸汽灭菌器、净化工作台。3.1.2操作环境：操作间应该安装空气除菌过滤层装置。环境洁净度不应低于10000级，局部洁净度为100级（或放置同等级净化工作台）。操作间或净化工作台的洁净空气应该保持对环境形成正压，不低于4.9pa。3.1.3试验样品：批号：批号：批号：3.1.4培养基：培养基名称培养基批号配制日期有效期至改良马丁琼脂培养基玫瑰红钠琼脂培养基胆盐乳糖增菌培养基营养琼脂培养基3.1.5稀释液：PH7.0无菌氯化钠-

4、蛋白胨缓冲液以上经115℃高压蒸汽灭菌30min。3.1.6验证用微生物名称及其编号实验菌株的来源：菌株名称内控编号大肠埃希菌CMCC(B)44102Ec-金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003Sa-枯草芽孢杆菌CMCC(B)63501Bs-白色念珠球菌CMCC(F)98001Ca-黑曲霉CMCC(F)98003An-编号由菌名首字母—传代代数—制备日期组成。3.1.7器具：无菌薄膜过滤器：（孔径0.45um直径50mm）、无菌移液管（5ml）4.验证方法4.1菌液的制备将大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌接种至10ml的无菌营养肉汤中在30～35

5、℃下培养18～24小时，将白色念珠菌接种至改良马丁液体培养基中，在23～28℃下培养24～48小时。将黑曲霉接种至改良马丁液体培养基中，在23～28℃下培养5～7天。将上述培养物用0.9%的无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌落数为50～100cfu的菌悬液。4.2实验方法供试液的制备：取样品10g（ml）加入无菌PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml，振摇使分散均匀□，或用匀浆仪混匀□，制成1：10均匀的供试液。A样品试验组取1：10供试品（相当于1g或1ml供试品）1ml，及各50～100cfu的试验菌，分别注入平皿中，立即倾注琼脂培养基。大肠埃希菌、金

6、黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌倾注肉汤琼脂培养基；白色念珠菌、黑曲霉倾注玫瑰红钠琼脂培养基。⑰海量资料超值下载B菌液组取上述制备菌液各1ml注入平皿中，金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草杆菌加入肉汤琼脂培养基，白色念珠菌、黑曲霉加入玫瑰红钠琼脂培养基。C供试品对照组取上述1：10供试液1ml注入平皿中，分别倾注肉汤琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基。D稀释剂对照组取PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液各1ml及各50～100cfu的试验菌，分别注入平皿中，立即倾注琼脂培养基。大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌倾注肉汤琼脂培养基；白色念珠菌、黑曲霉倾注玫瑰红钠琼脂培养

7、基。4.3培养将大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌在30～35℃下培养48小时，将白色念珠菌、黑曲霉在23～28℃下培养72小时，点计菌落数。5.试验结果⑰海量资料超值下载5.1产品试验组微生物生长检查情况：批号：菌种名称产品试验组计数结果（cfu/皿）平均值大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌黑曲霉5.2供试品对照组微生物生长检查情况：批号：菌种名称供试品对照组计数结果（cfu/皿）平均值大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌黑曲霉5.3稀释剂对照组微生物生长检查情况：批号：菌种名称稀释剂对照组计数结果（cfu/皿）平均值大肠埃

8、希菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌黑曲霉5.4菌液组微生物生长检查情况：批