人牙龈成纤维细胞诱导分化为血管内皮样细胞的研究

《人牙龈成纤维细胞诱导分化为血管内皮样细胞的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应法律责任。研究生虢刘哟导师签章：王浩二级掌箸孑摹专河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论

2、文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：刘赴鲥专导师签毒：曼洁20／多年弓月2占目目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3研究论文人牙龈成纤维细胞诱导分化为血管内皮样细胞的研究前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6日Ⅱ舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1l附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯13讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯39结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯43参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯44综述组织工程化血管内皮细胞的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯49致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．58个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．59中文摘要人牙龈成纤维细胞诱导分化为血管内皮样细胞的研究摘要目的：人体的组织可归纳为四大类型，即上皮组织、结缔组织、肌组织和神经组织。其中血管内皮细胞(vascularendothelialcell)属于上皮细胞，是衬覆于血管腔内膜上的一种单层扁平上皮。血管内皮细胞

4、能够保持血管壁的完整性和内表面的光滑，维持血管壁的通透性和血液流动性，还能分泌各种生物活性物质。血管内皮细胞是组织工程化血管构建的重要组成部分，是血管组织工程学的种子细胞之一。在口腔颌面部，牙龈作为牙周支持组织的一部分，其主要成分为纤维结缔组织(connectivetissue)。其中成纤维细胞(fibroblast)是构成纤维结缔组织的主要细胞成分，它取材方便，来源充足，具有很强的再生修复能力。有研究表明，牙龈纤维组织有望成为多潜能细胞分化的来源。本实验拟采用人牙龈成纤维细胞体外诱导培养，分化形成血管内皮样细胞。探讨成纤维细胞向上皮细胞，如血管内皮细胞转化的可能性，为组织工程化血管内皮的构

5、建，提供了新的种子细胞来源。方法：1人牙龈成纤维细胞的培养收集河北医科大学口腔医院口腔颌面外科，阻生齿拔除患者的正常牙龈组织。采用组织块贴壁培养法，培养牙龈成纤维细胞。培养液选用含15％胎牛血清的L．DMEM，0．25％胰蛋白酶消化传代。2人牙龈成纤维细胞的鉴定成纤维细胞传至第2代，采用鼠抗人vimentin单克隆抗体、鼠抗人III型胶原单克隆抗体，进行免疫细胞化学和免疫荧光染色鉴定，采用鼠抗人CD34和鼠抗人CD31单克隆抗体，作为阴性对照鉴定。3人牙龈成纤维细胞向血管内皮样细胞分化的诱导培养采用第2代人牙龈成纤维细胞进行诱导，培养液为无血清的L—DMEM培养液，并添加8ng／mlltE管

6、内皮生长因子(VEGF)、100U／ml青霉素和100U／ml链霉素，连续培养50天。中文摘要4血管内皮样细胞的鉴定采用鼠抗人CD31单克隆抗体、鼠抗人CD34单克隆抗体对细胞进行免疫细胞化学和免疫荧光技术鉴定，鼠抗人vimentin和鼠抗人ⅡI型胶原单克隆抗体阴性对照。5血管内皮样细胞透射电镜观察采用含8ng／mlVEGF的培养液连续诱导培养50天后，将得到的血管内皮样细胞收集并固定于2．5％的戊二醛中，透射电镜观察细胞超微结构。结果：1人牙龈成纤维细胞的培养牙龈组织块原代培养5～7天，组织块周围细胞爬出，细胞呈长梭形，细胞和细胞核较大，轮廓清楚，核仁大而明显，圆形或椭圆形。2成纤维细胞的

7、鉴定采用第2代细胞进行免疫细胞化学和免疫荧光染色技术鉴定。人牙龈成纤维细胞抗vimentin呈阳性反应；抗IⅡ型胶原阳性反应。3成纤维细胞向血管内皮样细胞的诱导牙龈成纤维细胞在无血清的血管内皮细胞诱导液中细胞形态逐渐发生变化，在倒置显微镜下细胞形态由长梭形变为多边形或立方形，呈现上皮细胞样形态，部分细胞汇合成片，平铺排列成鹅卵石或铺路石样结构，并逐渐形成血管腔样结构。4血管内皮样细胞的鉴定诱导后的细胞进行免疫