他莫昔芬对乳腺癌细胞周期蛋白e的影响及其信号机制研究

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1、《中国图书资料分类法》分类号：R966单位代码：10660学号：S10049贵阳医学院2013届硕士学位论文他莫昔芬对乳腺癌细胞周期蛋白E的影响及其信号机制研究研究生：李阳导师：王旭东教授宛蕾教授年级：2010级专业：药理学2013年5月10日贵阳医学院2013届硕士学位论文目录摘要……………………………………………………………1前言……………………………………………………………3材料与方法………………………………………………………5结果……………………………………………………………17讨论……………………………………………………………25

2、参考文献…………………………………………………………28英文摘要…………………………………………………………32研究生在读期间发表的论文……………………………………34致谢……………………………………………………………35略缩词表…………………………………………………………36论文原创性声明…………………………………………………38附:综述………………………………………………………390贵阳医学院2013届硕士学位论文*他莫昔芬对乳腺癌细胞周期蛋白E的影响及其信号机制的研究研究生：李阳导师：王旭东教授宛蕾教授专业：药理学摘要研究背景及目的：

3、在乳腺癌肿瘤细胞和组织中，可观察到野生型周期蛋白E（CCNE）表达上调，同时伴随大量低分子量周期蛋白E（LMW-CCNE）的生成。LMW-CCNE表达水平可预示乳腺癌患者临床预后不良和对抗雌激素治疗。他莫昔芬（TAM）长时间用于乳腺癌治疗可引起药物耐受及乳腺癌复发和转移,但其机制尚未明了。本研究旨在探讨4-羟基他莫昔芬(OHT，TAM的活性形式）对乳腺癌细胞CCNE蛋白剪切、细胞迁移的影响及其信号机制。方法：采用雌激素受体（ER）阳性/G蛋白偶联受体30（GPR30）阳性乳腺肿瘤细胞MCF-7和ER阴性/GPR30阳性细胞SK-BR-3为模

4、型系统，以ER阴性/GPR30阴性细胞MDA-MB-231作为对照。常规细胞培养，以OHT刺激模型细胞，通过蛋白印迹法观察蛋白质分子量变化，细胞划痕法观察细胞迁移变化；采用GPR30抑制剂G15或表皮生长因子受体（EGFR）抑制剂（EI）预处理模型细胞，或siRNA转染沉默靶基因表达，观察这些因素对OHT诱导CCNE蛋白剪切和细胞迁移的影响。结果：(1)雌激素（E2）可诱导乳腺癌MCF-7细胞CCNE剪切及细胞迁移，但OHT不能阻断E2诱导的上述效应，提示E2诱导的效应可能为非雌激素受体α（estrogenreceptorα）依赖性。(2)

5、采用OHT单独处理MCF-7或SK-BR-3细胞，可观察到类似于E2引起的CCNE蛋白剪切效应，而OHT对MDA-MB-231细胞CCNE无明显影响。以不同浓度的OHT（1~20μM）处理培养MCF-7和SK-BR-3细胞，发现1μMOHT即可诱导CCNE的蛋白剪切反应，呈量效依赖关系；时效观察显示，OHT在作用1h即可诱导明显效应，可持续~24h。结果提示，OHT*国家自然科学基金资助项目（No.30860093）*本文刊载于Toxicology.2013,309C:61-65.(IF3.681)1贵阳医学院2013届硕士学位论文诱导的上

6、述效应可能与GPR30有关，其特点为快速而持续。(3)GPR30特异性抑制剂G15（1μM）或siRNA沉默GPR30表达可显著抑制或消除OHT诱导MCF-7细胞CCNE蛋白剪切；G15明显抑制OHT诱导的细胞迁移，提示OHT诱导的MCF-7细胞反应可能是通过GPR30实现的。(4)EGF刺激可诱导类似OHT引起的CCNE反应，而细胞外信号激活蛋白激酶（ERK）磷酸化活化的抑制剂U0126或EGFR的抑制剂均可显著抑制或消除OHT诱导细胞CCNE蛋白剪切。结论:（1）OHT诱导MCF-7乳腺癌细胞CCNE的蛋白剪切，同时促进细胞迁移（2）O

7、HT通过GPR30-EGFR-ERK信号通路诱导CCNE蛋白剪切和细胞迁移;（3）GPR30介导的CCNE蛋白剪切和细胞迁移增强可能是OHT抗性产生的分子机制之一。关键词:他莫昔芬；周期蛋白E；G蛋白偶联受体30（GPR30）；乳腺癌；细胞迁移2贵阳医学院2013届硕士学位论文前言乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，乳腺癌严重威胁妇女生命和健康。乳腺癌发病率在欧美等发达国家及我国京津沪地区已占女性恶性肿瘤的首位。值得注意的是，在我国乳腺癌的发病率呈逐年上升及发病年轻化趋势，形势十[1]分严峻。近几十年来，在乳腺癌的早期诊断和治疗方法方面取得较

8、大进步，但其死亡率并没有明显下降。目前，临床治疗乳腺癌除手术切除和放疗、化疗法以外，还采用抑制雌激素受体（ER）或降低体内雌激素水平的内分泌治疗（endocrinetherapy