凡纳滨对虾(litopenaeus vannamei)c-型凝集素免疫作用机制的研究

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1、谨以此论文献给我的父母、导师和所有关心帮助过我的朋友们！----------于金红凡纳滨对虾（Litopenaeusvannamei）C-型凝集素免疫作用机制的研究学位论文答辩日期：指导教师签字：答辩委员会成员签字：独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年

2、月日--------------------------------------------------------------------------------------------------------学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，并同意以下事项：1、学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。2、学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权清华大学“中国学术期刊(光盘版)电子杂

3、志社”用于出版和编入CNKI《中国知识资源总库》，授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签字：签字日期：年月日签字日期：年月日凡纳滨对虾（Litopenaeusvannamei）C-型凝集素免疫作用机制的研究摘要本文研究了C-型凝集素对凡纳滨对虾（Litopenaeusvannamei）免疫作用调节机制的影响。主要探讨了（1）凡纳滨对虾C-型凝集素的原核表达；（2）脂多糖、重组C-型凝集素蛋白对凡纳滨对虾血细胞酚氧化酶原激活系统和信号传导的影响；（3）哈

4、维氏弧菌、重组C-型凝集素对凡纳滨对虾酚氧化酶原激活系统和信号传导的影响；主要结果如下：1凡纳滨对虾C-型凝集素基因的原核表达和活性检验本文根据凡纳滨对虾（Litopenaeusvannamei）C-型凝集素基因（C-lectin）cDNA序列设计引物，构建C-型凝集素基因原核表达载体，实现了该基因在大肠杆菌（Escherichiacoli）中的原核表达，并检测了重组C-型凝集素的免疫活性。结果表明：重组C-型凝集素经SDS-PAGE分析显示在39kD处有显著诱导条带，与预测的分子量大小基本一致，Westernblot分析可以与anti-His抗

5、体特异性结合，从而证明C-型凝集素重组蛋白在大肠杆菌中成功表达。重组C-型凝集素对小鼠和兔的红细胞没有明显的凝集作用，而对所选5种细菌的凝集作用存在差异，其中对大肠杆菌具有明显的凝集作用，而对溶藻弧菌、哈维氏弧菌、鳗弧菌和金黄色葡萄球菌均无凝集现象。2重组C-型凝集素对凡纳滨对虾血细胞免疫作用的研究本文采用血细胞悬浮培养的方法，研究了重组C-型凝集素对凡纳滨对虾血细胞免疫作用的影响。实验梯度设置为：对照组、重组C-型凝集素蛋白组（Lvlec，1mg/mL）、脂多糖组（LPS,1.0mg/L）、脂多糖+重组C-型凝集素蛋白（LPS+Lvlec，1.

6、0mg/L+1mg/mL），分别在0、3、6、9、12、24h取培养的血细胞和培养液进行免疫相关指标的测定。结果表明：重组C-型凝集素对凡纳滨对虾血细胞数量、存活率和吞噬率、凝集活力影响显著（P<0.05）；各处理组培养液酚氧化酶活力在培养3-12h内呈峰值变化，于9h时达到最大值（P<0.05）。血细胞cGMP含量、PKA活力在3-12h内呈峰值变化，各处理组均于9h时达到最大值，然后均恢复至对照组水平。由此可见，LPS、Lvlec对凡纳滨对虾血细胞具有明显的免疫调控作用，能激活酚氧化酶原系统，引发一系列免疫防御反应。3注射重组C-型凝集素对凡

7、纳滨对虾免疫防御机制的影响本文采用人工注射的方法，研究了重组C-型凝集素对凡纳滨对虾免疫作用的影响，实验梯度设置为：对照组、重组C-型凝集素蛋白（Lvlecprotein，1.06mg/mL）、哈维氏弧菌组（V.harveyi，10cfu/mL）、哈维氏弧菌+重组C-型凝集6素蛋白（V.harveyi+Lvlecprotein，10cfu/mL+1.0mg/mL）处理组，分别在0、3、6、9、12、24h取样品测定。结果表明：注射哈维氏弧菌悬液和重组C-型凝集素蛋白对凡纳滨对虾血细胞数量、血细胞酚氧化酶原、酚氧化酶活力、凝集活力、吞噬率、溶菌活力

8、和cGMP含量、PKA活力影响显著（P<0.05），而对照组无显著变化。结果表明：V.harveyi、Lvlec对凡纳滨对虾血细胞具有明