冀南地区禽致病性大肠杆菌o抗原鉴定及tsh表达载体的构建

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1、分类号墨墨§主：!UDC：密级：公珏单位代码：10076农学硕士学位论文删《㈣㈣㈣㈣Y2281393冀南地区禽致病性大肠杆菌。抗原鉴定及Tsh表达载体的构建作者姓名：夏玉龙指导教师：马兴树教授申请学位级别：农学硕士学科专业：动物遗传育种与繁殖所在单位：农学院授予学位单位：河北工程大学农学硕士学位论文冀南地区禽致病性大肠杆菌。抗原鉴定及Tsh表达载体的构建夏玉龙河北工程大学2013年5月ADissertationSubmittedto‘HebeiUniversityofEngineeringFortheAcademicDegreeofMasterofAgriculture0antigen

2、identificationofAvianpathogenicBl●●■●■●■●■一■-●匕SCnenCnlaCo¨anaConStrUCtIonotISnexpressionvectorinthesouthofHebeiProvinceCandidateSupervisorSpecialtyCollege／Department：XiaYulong：Prof．MaXingshu：AnimalGeneticsandBreeding：CollegeofAgricultureHebeiUniversityofEngineeringMay，2013独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是

3、本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得塑兰垦王堡盘鲎或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学雠文储虢蕴够易签字吼爿：年厂月多。日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解塑皇垦墨堡盘鲎有关保留、使用学位论文的规定。特授权塑兰垦墨猩盘鲎可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向

4、国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子文档。(保密的学位论文在解密后适用本授权说明)学位论文作者签名：剔程名‘眵魂丑事枷壹签字日期：a和年f月3内日签字日期：列；年y月3。日摘要禽致病性大肠杆菌病是由不同血清型的禽致病大肠杆菌引起的局部或全身感染性疾病，包括呼吸道感染，败血症，脐炎，肿头综合症以及蜂窝织炎等，这些疾病给养禽业带来了巨大的经济损失。大肠杆菌血清型众多，禽致病性大肠杆菌最常见血清型是Ol、02、078，其主要毒力因子包括荚膜、脂多糖复合物、粘附素、铁摄取系统、外膜蛋白，毒素、外膜蛋白、AGI一3基因组岛、侵袭素IbeA、Pst系统、大肠杆菌素等。尽管近年来关于大肠杆菌致病

5、机制方面的研究已取得重大进展，但对于细菌发病机制和毒力因子的作用未完全解释清楚。当前已经鉴定出编码APEC毒力因子的基因，基因缺失实验也已确认出I型菌毛、P菌毛，产气菌素、铁运输系统、温度敏感型血凝素在APEC致病性方面所起的作用。黏附素的表达被认为是禽致病性大肠杆菌感染过程中的一项重要毒力特征。APEC所描述的主要粘附素为I型菌毛，P菌毛和温度敏感型血凝素。温度敏感型血凝素由tsh基因编码，首次由Provence和Cttrtiss发现并鉴定，它可能在细菌定植于禽类呼吸道初始阶段时起粘附作用，体内实验也表明在禽类气囊感染中，Tsh蛋白起到黏附作用。本实验以临床所分离大肠杆菌为材料，首先

6、进行了一系列的常规试验，包括生化鉴定、药敏试验和O抗原鉴定。结果显示，43株大肠杆菌对10种抗菌药物均存在不同程度的耐药性，具有耐药性的菌株比例达到100％。43株细菌对红霉素和氨苄西林的耐药率达到了100％。除丁安卡那霉素(13％，13／43)以外，细菌对其它药物的耐药率均超多了50％，其中对羧苄西林(97％，42／43)，氟哌酸(95％，41／43)，复方新诺明(90％，39／43)的耐药性均达到了90％或以上。O抗原结果显示，本试验所分离大肠杆菌主要为02和078。进一步的试验通过以所分离大肠杆菌质粒为模板，利用PCR技术扩增出完整tsh基因片段，构建Tsh表达载体，将其导入DH

7、50【感受态并进一步进行PCR鉴定。关键词：禽致病性大肠杆菌；药敏实验；O抗原；温度敏感型血凝素AbstractAviancolibacillosisisoneofthemajorbacterialdiseasesthatcausedbymultipleserotypesofavianpathogenicEscherichia．coli(APEC)，includingrespiratorytractinfection，septicemia，om