perkeif2α通路负调控内质网应激抵抗copd气道上皮细胞凋亡的机制研究

《perkeif2α通路负调控内质网应激抵抗copd气道上皮细胞凋亡的机制研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、中图分类号＆§鱼三：3UDC6lO学校代码lQ§圣三密级公珏博士学位论文PERK／elF20通路负调控内质网应激抵抗COPD气道上皮细胞凋亡的机制研究DownregulationofEndoplasmicReticulumStressResistAirwayEpithelialCellApoptosisinCOPD：TheRoleofPERK／elF2aPathway作者姓名：袁婷学科专业：临床医学研究方向：内科学学院(系、所)：湘雅医院指导教师：罗百灵教授论文答辩日期：竺!i二兰二三2答辩委员

2、会主席正中南大学2013年5月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：埠日期：竺芝年』月4日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文

3、，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：埠导师签名峰日期．盟年』月毕日摘要PERK／elF2a通路负调控内质网应激抵抗COPD气道上皮细胞凋亡的机制研究研究背景：气道上皮细胞凋亡是COPD发病的重要机制之一，而内质网应激(ERS)介导的细胞凋亡亦越来越被重视。在烟草等有害物质刺激下，细胞通过启动未折叠蛋白反应(

4、UPR)减少蛋白合成、增加未折叠蛋白的降解以减轻细胞对应激环境负担。在内质网应激状态下，PERK通路首先激活并具有极其重要的作用。PERK通过寡聚化和自身磷酸化活化，导致其下游因子真核翻译起始因子2仅亚单位(elF2a)磷酸化，磷酸化的elF2a可直接抑制蛋白合成，致使新生的多肽流出内质网以减轻其负担，维持细胞内环境平衡。而当刺激持续，内质网应激将诱导caspase家族、CHOP等的表达诱导细胞凋亡。体外研究发现在PERK／elF2tt这条通路被敲除后，细胞对内质网应激所致凋亡敏感性增加，而增强

5、PERK／elF2a通路，细胞凋亡减少，证明上调PERK通路在ERS中具有对抗细胞凋亡的作用。基于目前在COPD发病中，PE砌刚eIF2a通路在内质网应激诱导的细胞凋亡中如何作用，其与CHOP、caspase关系尚不明确，拟以COPD大鼠及香烟烟雾提取物(CSE)干预人支气管上皮细胞(衄E)为主要模型，探讨PERK通路相关信号分子、凋亡信号指标及之间关系，研究PERK通路的活化剂salubrinal在其中的作用，本课曩由田家自然科学基金面上项目赉助项目编号l309713241I旨在证实PERK通

6、路在COPD内质网应激诱导的细胞凋亡中具有重要作用，为临床治疗COPD提供新的理论基础和治疗靶点。第一章PERK／eIF2a通路在COPD大鼠支气管肺组织中凋亡中的作用目的：观察PERK通路在COPD大鼠内质网应激所致支气管肺组织是否活化及salubrinal对香烟烟雾所致气道上皮细胞凋亡的影响。方法：36只Wistar大鼠随机均分为3组：正常对照组、COPD模型组、COPD模型加药物组(简称干预组)。采用被动吸烟加气管内滴注脂多糖(LPS)法建立大鼠COPD模型，药物组在滴注脂多糖的同时气管内

7、滴注salubrinal(1mg／kg)。造模完成后，测定各组大鼠的肺功能；观察肺组织病理学变化；免疫组化检测p-PERK、p-elF2a、caspase-12在支气管肺组织中的表达和分布；westernblot检测p-PERK、p-elF2a、activecaspase一12和activecaspase．3蛋白水平；TUNEL法检测支气管肺组织上皮细胞凋亡。结果：模型组的各项肺功能指标较正常组均明显降低，但以salubrinal干预后大鼠各项肺功能指标较于模型组有明显升高。在模型组中内质网应激

8、PERK通路的指标p-PERK、p-elF2a较正常组相比增高，而干预组的p-elF2a的表达水平最高；模型组的凋亡指标activecaspase一12和activecaspase一3表达较正常组明显升高，干预组凋亡较模型组减少。结论：(1)采用气管内滴注脂多糖加烟熏的方法成功地构建了COPD大鼠模型；(2)COPD大鼠支气管肺组织发生了内质网应激，启动了PERK介导的UPR信号通路；(3)salubrinal可保护COPD模型大鼠支气管肺泡上皮细胞免于凋亡，可能通过调节PERK／elF2a通路