pdlsc体外分离培养及20-hydroxyecdysone对pdlsc 增殖和成骨分化作用的研究

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1、中图分类号：硕士学位论文PDLSC体外分离培养及20-Hydroxyecdysone对PDLSC增殖和成骨分化作用的研究院（系）、所口腔医学院研究生姓名侯成玉学科、专业口腔临床医学导师姓名李晨军二Ο一三年四月目录1PDLSC体外分离培养及20-Hydroxyecdysone对PDLSC增殖和成骨分化作用的研究......................................................................................................11.1中文摘要...................................

2、.................................................................................11.2英文摘要....................................................................................................................41.3前言.........................................................................................

3、............................81.4实验一人牙周膜干细胞的体外分离培养及多向诱导分化...........101.5实验二20-Hydroxyecdysone对PDLSC增殖和成骨分化作用的研究231.6全文小结.....................................................................................................351.7本研究不足之处...................................................................

4、.................................361.8参考文献..................................................................................................................371.9英文缩略词对照表................................................................................................422致谢..............................

5、.....................................................................................433骨髓间充质干细胞成骨分化过程中细胞因子的作用（综述）......45PDLSC体外分离培养及20-Hydroxyecdysone对PDLSC增殖和成骨分化作用的研究中文摘要20-羟基蜕皮甾酮（20-Hydroxyecdysone，20E）是蜕皮类固醇激素中的一员，能够促进间充质干细胞成骨分化。人牙周膜干细胞(Periodontalligamentstemcells,PDLSC)来源于人牙周膜细胞（Periodontall

6、igamentcells，PDLC），具有间充质干细胞的特性，PDLSC被视为临床中治疗牙周炎的候选之一。然而,目前还没有关于20E对PDLSC作用的研究。目的：讨论应用组织块法、酶消化法、酶解组织块法3种方法体外分离培养人PDLC的优点及缺点；研究PDLSC体外分离、鉴定和诱导分化；研究20E在体外对PDLSC增殖、ALP活性和成骨分化的作用。方法：1、分别应用组织块法、酶消化法、酶解组织块法3种方法培养PDLC。应用有限稀释法克隆化培养、分离纯化得到PDLSC，应用克隆形成实验检测克隆形成率；为描述单克隆得到的PDLSC的干细胞表型标记，应用流式细胞技术检测表面标志物STRO-1、CD14

7、6和CD45的表达；为检测PDLSC的多向分化能力，应用成骨诱导液、成脂诱导液诱导PDLSC成骨、成脂分化。2、将3PDLSC以5×10个/ml的浓度，每孔200ulDMEM，接种于96孔板培养。培养24h以后,弃掉原来的培养液,分别加入含有0、50、100、200、400uM的20E的培养液，这些细胞随后再被培养1-10天。在1-10d的同一时点，采用MTT法检测对其体外增殖能力的影响。最后，5