rap2相互作用蛋白的鉴定与功能分析

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1、硕士学位论文Rap2相互作用蛋白的鉴定与功能分析THEIDENTIFICATIONANDFUNCTIONANALYSISOFRAP2INTERACTIONPROTEIN韩京华哈尔滨工业大学2015年6月国内图书分类号：Q71学校代码：10213国际图书分类号：577.21密级：公开理学硕士学位论文Rap2相互作用蛋白的鉴定与功能分析硕士研究生：：韩京华导师：：施树良副教授申请学位：：理学硕士学科：：生物学所在单位：：生命科学与技术学院答辩日期：：2015年6月授予学位单位：：哈尔滨工业大学Classifie

2、dIndex:Q71U.D.C:577.21DissertationfortheMasterDegreeinScienceTHEIDENTIFICATIONANDFUNCTIONANALYSISOFRAP2INTERACTIONPROTEINCandidate：JinghuaHanSupervisor：Prof.ShuliangShiAcademicDegreeAppliedfor：MasterofScienceSpeciality：CellBiologyAffiliation：SchoolofLifeSc

3、ienceandTechnologyDateofDefence：June,2015Degree-Conferring-Institution：HarbinInstituteofTechnology哈尔滨工业大学理学硕士学位论文摘要Rap2是Ras家族Rap亚族的成员之一，具有三种异构体，分别为Rap2a、Rap2b及Rap2c，参与调控多种细胞的基本生命活动。Rap2与Rap1同属于Rap亚族，它们在氨基酸序列上有60%同源性，因此Rap2具有与Rap1相似的生物学功能。Rap2能够与Ras家族共有的下游效

4、应因子相结合，而且Rap2还具有特异性的相互作用蛋白，如MINK、TINK、PARG1，通过与它们相互作用参与调控多种细胞信号通路。本文主要研究新的Rap2特异的相互作用蛋白。本文首先利用免疫共沉淀和蛋白质谱分析的方法在稳定表达Rap2的NC65细胞系中研究未知的Rap2相互作用蛋白，发现在NC65细胞中Vimentin和H2B可以与Rap2相互作用。然后利用免疫荧光、免疫共沉淀以及酵母双杂交实验进一步验证Vimentin与Rap2、H2B与Rap2之间的相互作用关系。免疫荧光结果表明在NC65细胞中Vim

5、entin与Rap2以及H2B与Rap2均有共定位的趋势，免疫共沉淀和酵母双杂交实验结果确定了Vimentin是Rap2的相互作用蛋白，并且Vimentin与Rap2之间发生间接相互作用。然而H2B与Rap2之间的相互作用关系需要进一步证实。最后利用划痕实验的方法研究Vimentin与Rap2共表达对细胞运动的影响，结果表明Vimentin过表达促进NC65细胞迁移，Rap2与Vimentin共表达也增强NC65细胞的运动能力。为进一步研究Rap2的功能及其作用机制提供基础。关键词：Rap2；波形蛋白；H2

6、B；迁移；侵袭-I-哈尔滨工业大学理学硕士学位论文AbstractRap2isamemberofRapsubfamilyamongtheRasfamily,consistingofthreeisoforms,includingRap2a,Rap2bandRap2c.Theyareinvolvedinregulationofawidevarietyofcellularprocesses.MembersoftheRapsubfamilyincludeRap1andRap2.Rap1areabout60%homo

7、logouswithRap2,therefore,thebiologicalfunctionofRap2issimilartoRap1.Rap2canbeassociatedwiththecommondownstreameffectfactorsofRasfamily,andRap2alsohasitsspecificbindingproteins,suchasMINK,TINKandPARG1.Rap2isinvolvedinregulationofmanycellsignalingpathwaysthr

8、oughitsspecificbindingproteins.ThispapermainlystudiesthenewRap2specificbindingproteins.Inthisstudy,weinvestigatedtheunknownRap2bindingproteinsintheNC65renalcancercelllinewiththestableexpressionofRap2byCo-immu