cd133+肺癌细胞的放射生物学特性研究

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1、单位代码10475学号104753101236分类号R73-3硕士学位论文CD133+肺癌细胞的放射生物学特性研究学科、专业：医学院肿瘤学研究方向：肿瘤放疗申请学位类别：医学硕士申请人：蔡迎春指导教师：宋永平袁翎教授二〇一三年五月RADIOBIOLOGYCHARACTERISTICSOFCD133POSITIVECELLSINHUMANLUNGCANCERADissertationSubmittedtotheGraduateSchoolofHenanUniversityinPartialFulfillmentoftheRequirementsforthe

2、DegreeofMasterofMedicineByCaiYingchunSupervisor:Prof.SongYongpingandYuanLingDate：MAY,2013关于学位论文独创声明和学术诚信承诺本人向河南大学提出硕士学位申请。本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师的指导下独立完成的，对所研究的课题有新的见解。据我所知，除文中特别加以说明、标注和致谢的地方外，论文中不包括其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包括其他人为获得任何教育、科研机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同事对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明

3、并表示了谢意。在此本人郑重承诺：所呈交的学位论文不存在舞弊作伪行为，文责自负。学位申请人（学位论文作者）签名：2013年5月10日关于学位论文著作权使用授权书本人经河南大学审核批准授予硕士学位。作为学位论文的作者，本人完全了解并同意河南大学有关保留、使用学位论文的要求，即河南大学有权向国家图书馆、科研信息机构、数据收集机构和本校图书馆等提供学位论文（纸质文本和电子文本）以供公众检索、查阅。本人授权河南大学出于宣扬、展览学校学术发展和进行学术交流等目的，可以采取影印、缩印、扫描和拷贝等复制手段保存、汇编学位论文（纸质文本和电子文本）。（涉及保密内容的学位论

4、文在解密后适用本授权书）学位获得者（学位论文作者）签名：2013年5月10日学位论文指导教师签名：2013年5月10日摘要研究背景与目的：直到现在肺癌的5年生存率都处于很低的水平，且是全世界恶性肿瘤主要的死亡原因之一，目前肺癌的死亡率通过手术、放疗、化疗以及综合治疗等治疗方式还是不能得到很好的控制，近年来伴随着对肿瘤和干细胞的深入探究，已有假说认为肿瘤可能是一种由干细胞引发产生的疾病，肿瘤干细胞（cancerstemcells,CSCs）的生物学特性有自我更新、分化及发展成异质性肿瘤，并且肿瘤干细胞尽管只占整个实体肿瘤很小的一部分未分化细胞亚群，但还是形

5、成多种实体肿瘤包括肺癌在内的各种肿瘤的主要来源，且驱动着肿瘤的维持、发展、转移及复发，具有化疗和放疗的治疗抗性。在现时代医学领域，放射治疗成为对实体肿瘤有疗效潜能的治疗技术，并且认为肿瘤细胞在放疗过程中被杀死主要通过导致细胞DNA严重损伤来实现治疗肿瘤的，其中包括DNA单链断裂（SSB）、双链断裂（DSB）及碱基损伤，还有共价键形成的DNA-DNA交联和DNA-蛋白质交联等多种损伤形式，其中DNA双链断裂被证实是最主要的形式，因此DSB的修复能力就成为影响肿瘤放射敏感性，以及决定细胞的存活与死亡的主要因素之一，放射治疗引起的DSB能激活DNA-PK、AT

6、M及ATR等，随即便可迅速的修复DSB，还能够激活DNA损伤信号传导通路中的与修复相关因子的转录，最终导致细胞周期阻滞或者诱发细胞凋亡。虽然放疗能够清除大量肿瘤细胞，但残存的肿瘤干细胞可能在恶性肿瘤治疗失败的原因方面起关键作用，因此准确分离鉴定及根除肿瘤干细胞已成为现阶段研究的主要方向。在人类造血干细胞中首先被发现的一种CD133表面表达基因，它已被公认为多种干细胞的表面标志物之一，本研究通过普遍的肿瘤标志物CD133应用磁珠分选法来分离出CD133+肺癌细胞，然后对其放射生物学特性来做一研究,为进一步探究与放射敏感性有关的特异性传导通路的分子机制做准备

7、，希望从肺癌干细胞的角度找到治疗肺癌的好方法,在临床方面指导恶性肿瘤的治疗。研究方法：1.应用磁珠分选法分离肺癌H2228细胞中的CD133+细胞。2.利用细胞计数板进行细胞计数进而描绘出CD133+肺癌细胞及H2228（未经分选的肺癌细胞）的生长曲线。I3．细胞克隆形成实验测定CD133+肺癌细胞和H2228细胞在不同剂量下的存活率，分别用单击多靶模型和线性二次模型拟合照射剂量存活曲线，并求出放射生物学参数D0，Dq和α,β，2Gy的存活分数(SF2)来评估两种细胞的放射敏感性。4.利用流式细胞仪检测可反映放射敏感性的两种指标：细胞周期分布及细胞凋亡，

8、进一步比较两者的放射敏感性。结果：1.磁珠分选的结果显示通过阳性分离柱，即MS柱