富硒罗汉果中罗汉果皂苷ｖ的ｈｐｌｃ测定

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1、富硒罗汉果中罗汉果皂苷Ｖ的ＨＰＬＣ测定-农学论文富硒罗汉果中罗汉果皂苷Ｖ的ＨＰＬＣ测定陈薇１，刘庚贵２，段小群１，吴卫１（１．桂林医学院，广西桂林５４１００４；２．桂林甙元生物科技有限公司，广西桂林５４１００１）摘要：建立富硒罗汉果（Ｓｉｒａｉｔｉａｇｒｏｓｖｅｎｏｒｉｉ）果实中罗汉果皂苷Ｖ的ＨＰＬＣ测定方法，以ＤｉａｍｏｎｓｉｌＣ１８（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ）为固定相，乙腈－水（２４∶７６，Ｖ／Ｖ）为流动相，检测波长２０３ｎｍ，流速１．０ｍＬ／ｍｉｎ，柱温３０℃。结果表明，罗汉果皂苷Ｖ在０．２

2、１～２．１０μｇ范围内线性关系良好（ｒ＝０．９９９３），平均回收率为９７．６４％，ＲＳＤ为１．６６％。该方法可用于富硒罗汉果果实中罗汉果皂苷Ｖ含量的测定。关键词：罗汉果（Ｓｉｒａｉｔｉａｇｒｏｓｖｅｎｏｒｉｉ）；罗汉果皂苷Ｖ；高效液相色谱法中图分类号：Ｒ２８４．１文献标识码：A文章编号：0439－８114（２０15）02－0444-02DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.02.048罗汉果（Ｓｉｒａｉｔｉａｇｒｏｓｖｅｎｏｒｉｉ）属葫芦科（Ｄｕｃｕｒｂｉｔａｃｅ

3、ａｅ），主产于广西，为中国特色植物，在东南亚及欧美地区享有良好声誉，备受人们青睐，被誉为“东方神果”。罗汉果味甘、性凉，具有清热润肺，利咽开音，滑肠通便等功效，常用于治疗肺火咳嗽、咽痛失音、便秘等，药用价值高［１］。富硒罗汉果是近年研制出的罗汉果新品种，除上述功效外，富含硒元素，具备清除体内过量羟基自由基的功效［２］，可抗氧化、增强免疫力、抗疲劳等［３，４］。葫芦烷型三萜皂苷类成分罗汉果皂苷Ｖ是富硒罗汉果中的主要有效成分［５－８］，通过建立富硒罗汉果中罗汉果皂苷Ｖ的ＨＰＬＣ分析方法，将有助于控制富硒罗汉

4、果制剂的质量，为开发相关产品提供参考。１材料与方法１．１材料与试剂富硒罗汉果（产地：广西桂林，桂林亦元生现代生物技术有限公司提供，经桂林医学院生药学教研室品种鉴定为富硒罗汉果）；罗汉果皂苷Ｖ（批号：２０１２０６１９，纯度≥９８％，上海源叶生物科技有限公司）。甲醇、乙腈为色谱纯，去离子水等。１．２仪器１１００型高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；ＢＳ１１０Ｓ型电子分析天平（北京赛多利斯天平有限公司）；１８１０Ａ型电热恒温水浴锅（上海医疗器械五厂）；ＳＹ－３６０型超声波提取器（上海宁商超声仪有限公司）；ＭＳＰ

5、－８６００型微波消解仪（北京北分瑞利分析仪器公司）。１．３方法１．３．１色谱分析以ＤｉａｍｏｎｓｉｌＣ１８（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ）为色谱柱，以乙腈－水（２４∶７６）为流动相，检测波长为２０３ｎｍ，柱温３０℃，流速１．０ｍＬ／ｍｉｎ，样品过０．２２μｍ微孔滤膜后，进样１０μＬ，其理论板数按罗汉果皂苷Ｖ峰计算应不低于３０００。１．３．２对照品溶液的制备称取１０．５ｍｇ罗汉果皂苷Ｖ于５０ｍＬ容量瓶中，加甲醇溶解并定容至５０ｍＬ，摇匀，得０．２１ｍｇ／ｍＬ对照品溶液。１．３．３供试品溶液的制备取富硒罗

6、汉果粉末０．５ｇ，加入甲醇５０ｍＬ，加热回流２ｈ，回收溶剂，减压蒸干，加去离子水１０ｍＬ溶解，以ＡＢ－８大孔树脂柱纯化，依次以去离子水、２０％（Ｖ／Ｖ）乙醇各１００ｍＬ洗脱［７］，弃去洗脱液，５０％（Ｖ／Ｖ）乙醇１００ｍＬ洗脱，收集洗脱液，挥干，残渣以流动相溶解，定容至１０ｍＬ，摇匀待测。１．３．４硒的测定取富硒罗汉果粉末０．５ｇ于消化管中，加１０ｍＬ硝酸、２ｍＬ过氧化氢，摇匀，微波消化后，加水至２５ｍＬ，用稀盐酸调至ｐＨ２，加１％（m/v）邻苯二胺２ｍＬ，振摇，放置１ｈ，加甲苯１０ｍＬ萃取，取甲苯液，

7、在３４０ｎｍ处测定，并计算硒含量。２结果与分析２．１线性关系的考察对照品和样品的色谱图见图１。由图１可知，该方法可实现目标化合物的有效分离。取罗汉果皂苷Ｖ对照品溶液，分别吸取不同体积（２～２０μＬ）注入液相色谱仪分析，峰面积（Ｙ）与进样量（Ｘ）的线性回归方程为Ｙ＝３１０６６２．９Ｘ＋１０７．３（ｒ＝０．９９９３）。结果表明，罗汉果皂苷Ｖ进样量在０．２１～２．１０μｇ范围内与峰面积线性关系良好。２．２方法学分析取供试品溶液，重复进样测定６次，罗汉果皂苷Ｖ峰面积的ＲＳＤ为１．１２％，说明本方法精密度良好；称

8、取６份样品，各０．５ｇ，参照上述方法分析，测定样品中罗汉果皂苷Ｖ平均含量达１０．７５ｍｇ／ｇ（ＲＳＤ＝１．３７％），表明该方法重现性良好；称取样品０．５ｇ，参照上述方法制备样品提取液，并于０，１，２，４，６，１２，２４ｈ测定，其峰面积ＲＳＤ为２．０３％，表明提取液中罗汉果皂苷Ｖ在２４ｈ内稳定性良好；称取已知罗汉果皂苷Ｖ含量为１０．７５ｍｇ／ｇ的富硒罗汉果样品粉末０．２５ｇ，然后加一定量的罗汉果皂苷Ｖ，测定分析，计算回收率为９５％～１０５％，