hplcelsd法测定桔梗中3种桔梗皂苷的含量

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1、HPLCELSD法测定桔梗中3种桔梗皂苷的含量：叶静，肖美添，汤须崇，黄雅燕【摘要】目的建立测定桔梗药材中桔梗皂苷D、D3、E含量的方法。方法采用高效液相色谱蒸发光激光闪射检测器(HPLCELSD)法，HypersilC18柱(5μm，.6mm×150mm)，以乙腈-水为流动相梯度洗脱，流速1.0mL/min，ELSD漂移管温度113℃，载气(N2)流速3.0L/min。　结果桔梗皂苷D、D3、E的线性范围分别为13.78～275.6μg/mL(r=0.9995)、8.40～168.0μg/mL(r=0.9997)、12.02～240.4μg/mL(r=0.

2、9996)，平均回收率(n=5)为98.3%、99.4%和101.3%。结论本法操作简便，结果准确可靠，可用于桔梗皂苷D、D3、E含量的测定。【关键词】桔梗;桔梗皂苷;HPLCELSD　　ABSTRACT:ObjectiveToestablishaquantitativemethodtodeterminethecontentofplatycodinD,D3andEinRadixplatycodi.MethodsHighperformanceliquidchromatagraphyevaprorativelightscatteringdector(HPLCEL

3、SD)method,4.6mm×150mm)obilephaseinagradientprogram;floL/min,thetemperatureofdrifttubein.ResultsThelinearrangesofplatycodinD,D3andEL(r=0.9995),8.40-168.0μg/mL(r=0.9997)and12.02-240.4μg/mL(r=0.9996),respectively.Theaveragerecoveries(n=5)ethodisconvenient,accurateandreliable,andcanbeused

4、forthedeterminationofplatycodinD,D3andEinRadixplatycodoi.　　KEY102色谱工作站)，AlltechELSD2000型蒸发光散射检测器，超纯水器(美国Milipore公司)。供试的桔梗药材购自江西省樟树药材市场，经本校刘青副教授鉴定为Platycodongrandiflorum(Jacq.)A.DC.的干燥根;对照品桔梗皂苷D、D3、E由本实验室制备型HPLC制备而得，经红外光谱(IR)、质谱(MS)、1H核磁共振(1HNMR)、13C核磁共振(13CNMR)等手段鉴定结构，HPLC法测定含量，以

5、峰面积归一化法计算，含量均大于99.0%。　　2方法与结果　　2.1色谱条件色谱柱为HypersilC18柱(5μm，4.6mm×150mm);流动相：乙腈(A)水(B)，梯度洗脱(0～15min，A由15%线性变化到25%;15～30min，A由25%线性变化到35%;30～50min，A由35%变化到100%);流速1.0mL/min;柱温为室温;进样量：20μL;ELSD检测器检测参数：漂移管温度113℃;载气(N2)流速3.0L/min。色谱图见图1。　　2.2对照品溶液的制备精密称取对照品桔梗皂苷D6.89mg、桔梗皂苷D34.20mg、桔梗皂苷E6.

6、01mg，置于同一25mL量瓶中加适量甲醇溶解，稀释至刻度，摇匀，即得混合对照品溶液。实验前过0.45μm滤膜，备用。　　2.3供试品溶液的制备精密称取干燥粉碎过60目筛的桔梗药材1.0g，加入30mL甲醇超声提取3次，每次30min。合并提取液，浓缩蒸干，用甲醇定容至25mL量瓶中，作为供试品溶液。实验前供试品溶液经0.45μm滤膜过滤，备用。　　图1对照品(A)和湖南省样品(B)的HPLC色谱图　　Fig.1HPLCchromatogramsofreferencesubstances(A)andasample(B)　　1：桔梗皂苷E;2：桔梗皂苷D3;3：桔梗

7、皂苷D。　　2.4线性关系考察分别精密量取混合对照品溶液0.5、1、2、4、6、8、10mL于10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，进样20μL。分别以峰面积的积分值为纵坐标，对照品的浓度(μg/mL)为横坐标，得桔梗皂苷D、D3、E的线性回归方程分别为：　　Y=2440.9X-2291.2r=0.9995　　Y=3197.7X-943.40r=0.9997　　Y=1007.2X-790.38r=0.9996　　线性范围分别为13.78～275.6、8.40～168.0、12.02～240.4μg/mL。　　2.5精密度试验精密吸取同一供试品溶液20μL，连续进

8、样5次，测