中国明对虾vg和alf基因启动子克隆与活性分析

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1、密级：学校代码：10075分类号：学号：20101293农学硕士学位论文中国明对虾Vg和ALF基因启动子克隆与活性分析学位申请人：李理想指导教师：谢松教授柳峰松教授学位类别：农学硕士学科专业：水产养殖授予单位：河北大学答辩日期：二〇一三年五月ClassifiedIndex:CODE:10075U.D.C.:NO.:20101293ADissertationfortheDegreeofM.AgronomyCloningandCharacterizationofVgandALFPromotersfromFenneropenaeuschinensisCandidate:

2、LiLi-XiangSupervisor:Prof.XieSongandLiuFeng-SongAcademicDegreeAppliedfor:MasterofAgricultureSpecialty:AquacultureUniversity:HebeiUniversityDateofOralExamination:May,201324摘要摘要对虾是我国重要的水产养殖品种之一，但近年来各种疾病频繁发生，这对对虾养殖业造成了巨大的经济损失。卵黄蛋白原（vitellogenin，Vg）和抗脂多糖因子（Anti-lipopolysaccharidefactor，AL

3、F）在对虾生长和抗菌免疫过程中起着重要作用。研究和了解对虾卵黄蛋白原和抗脂多糖因子的调控机理，对对虾人工育苗和养殖产业的发展具有重要的理论价值和现实意义。本文以中国明对虾为研究对象，主要研究内容如下：第1部分：通过DNA步移法克隆了1100bp的Vg基因启动子区和2114bp的ALF基因编码区及上游调控序列序列。分析发现，ALF基因含有两个大小分别为365bp和319bp的内含子，而启动子区为738bp。利用多个网站对核心启动子以及顺式调控元件进行预测，结果显示，两条基因都含有评分为1的+1位和一个TATAbox，未发现有CAATbox和GCbox。此外，在上游调

4、控区都存在着多个可能影响启动子转录活性的顺式作用元件，如NF-κB、YY1和SP1等转录因子结合位点。第2部分：截取不同长度Vg基因和ALF基因启动子片段（PVg和PALF）构建荧光表达载体，转染SF-9细胞来验证其功能。结果表明：4个PVg以及4个PALF驱动的pEGFP表达载体在SF-9细胞内都不能表达荧光，且前者在17β-雌二醇的刺激作用下也不能表达荧光。但后者在脂多糖或β-1,3葡聚糖的刺激下，部分载体能在细胞中表达绿色荧光蛋白。这说明PALF属于诱导型启动子。关键词：中国明对虾；卵黄蛋白原；抗脂多糖因子；启动子；顺式作用元件IAbstractAbstra

5、ctShrimpisoneofthemostimportantaquaculturespeciesinourcountry.Butrecentyears,variousdiseasesoccurfrequentlywhichcausedgreateconomiclossestoshrimpfarming.Vitellogeninandanti-lipopolysaccharidefactorplayimportantrolesintheprocessofgrowthandanitbacterialimmunizationoftheshrimp.Understand

6、ingtheregulationmechanismofvitellogeninandanti-lipopolysaccharideofshrimparemeanfulforartificialbreedingandthedevelopmentofaquacultureintheoryandreality.Inthispaper,weuseFenneropenaeuschinensissastheresearchobject,themainresultsareasfollows:Part1:ThepromoterofVgandthecodingregionsofAL

7、F,includingtheupstreamregulatoryregion,wereamplifiedbyGenomeWalkingmethod.Thesequenceis1100bpand2114bp,respectively.ThefindingbyanalysisisthattheALFcontaintwointons,365bpand319bp,respectively,andtheup-streamregulatoryfragmentof738bp.Thecorepromoterandcis-actingelementswerefoundusingmu

8、ltipl