hiv感染者不同感染阶段自然杀伤细胞功能变化

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1、材料和方法⋯⋯⋯．．：⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．15实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．18讨论⋯⋯⋯．．．⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．28结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．3l}『i{、本研究创新性的自我评价⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯‘⋯⋯⋯．32fi、参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯：⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．3：{人、附采综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．j．’⋯⋯⋯⋯．’⋯⋯．．36致阱⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．{g个人简介⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．50化是由

2、重传是无法攻克的难题。研究表明，在HIV感染过程中，免疫系统一方面受到病毒感染．的损害，另一方面发挥抗病毒的功能，抑制病毒复制。自然杀伤细胞(naturalkillercell，NK)是天然免疫系统中的重要效应细胞，在控制肿瘤和微生物感染中发挥重要作用。目前，关于HIV慢性感染嚣NK细胞功能变化的研究结果不尽相同。·另外，关于HW原发感染者(primaryHIVinfection，PHI)和长期不进展者(Longtermnon-progressor，LTNP)NK细胞功能的变化还鲜有报道。我国人群的NK

3、细胞数量和亚群分布与欧美国家人群不同，因此对我国HIV感染者NK细胞功能的研究非常重要。NK细胞作为机体抗肿瘤和感染的第一道防线，在获得性免疫应答之前就发挥免疫作用来保护机体，同时也是连接天然免疫和获得性免疫的桥梁，因此研究NK细胞功能在HIV疾病进展中的变化具有重要的科学意义。本研究应用多色流式细胞分析技术，选择interferon—y(IFN-1,)、CDl07a和颗粒酶B对HW感染者NK细胞分泌抗病毒细胞因子IFN-),功能以及细胞毒性功能进行研究。方法1、研究对象选取未接受过抗病毒治疗的HIV感

4、染者，按感染时间不同选取HIV原发感染组(PHI组)10例、HIV慢性感染组(CHI组)18例。按疾病进展不同选取分为长期不进展组(LTNP组)13例及典型进展组(TP组)18例。健康对照组(NC组)为13例随机抽取的HIV抗体阴性、未暴露于HIV的健康人，性别、年龄均与HIV感染者匹配。2、CD4+T细胞绝对值的检测将201xlBD公司CD4FITC／CD8PE／CD3PerCP试剂加入绝对计数管中，逆向加样法加入50p．1混匀的抗凝全血，室温避光15min，加入1×免洗溶血素4501d，室温避光15

5、min，应用FACSCalibur流式细胞仪迸行检测，MultiSET软件分析结果，得到CD4+T淋巴细胞的绝对值。3、NK细胞功能实验复苏冻存的人外周血单个核细胞，孵育过夜。与缺乏MHC．I类分子的K562细胞系(E：T为5：1)共孵育，同时加入抗CDl07a抗体和GolgiStop，共同孵育6小时。用抗体组合CD3-Percp／CD56一Pe—cy7(美国BD公司)进行表面染色。使用BDCytofix／CytopermTMFixation／PermeabilizationKit(美国BD公司)进行破

6、膜10分钟，．胞内染色IFN吖-FITC，granzymeB．FITC(美国BD公司)，4"C，30分钟。用1％多聚甲醛固定。4、HIV病毒载量测定采用Roche公司COBAS@AmpliPrep固／COBAS静TaqMan*HIV-1Test试剂盒在RocheCOBAS@AmpliPr印@上提取核酸后转移到COBAS@TaqMan⑩系统进行全自动PCR反应体系制备及病毒载量检测。5、统计学分析应用SPSSl1．5软件包进行统计分析，所有数据以中位数表示，两组间实验．指标的比较采用Mann-Whitne

7、yU检验，相关性分析采用Spearman秩相关检验，P≤O．05为有统计学意义。结果一、HIV原发感染者和慢性感染者NK细胞功能的变化l、HIV原发感染者和慢性感染者NK细胞及亚群构成情况HIV慢性感染者NK细胞百分比显著低于健康对照组(P=0．034)，而H1V原发感染者CD3。CD56dimNK细胞的百分比高于健康对照组和慢性感染者(P=O．014，P--O．015)，CD3-CD56bfigUNK细胞百分比各组问无显著差异。2、NK细胞分泌IFN-1'功能的变化各组产生IFN吖的CD3-CD56h

8、NK细胞百分比没有显著差异。原发感染者CD3’CD56di吓IK细胞亚群分泌IFN吖的百分比显著低于HIV慢性感染者(P=o．017)。2HIV慢性感染者CD3‘CD56嘶ghtNK细胞亚群分泌ⅡN吖的百分比高于健康对照者(P=0．027)。3、CDl07a在NK细胞表面表达的变化HW慢性感染者CD3-CD56+NK细胞及CD3‘CD5Cin咂群CDl07a表达水平高于健康对照组(P=O．033，P=0．034)。HIV原发感染者CD3-C