血管紧张素ⅱ对体外培养人牙髓细胞生物学特性影响的实验研究

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1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有0≯一≯．、否则，承担相应法律责任。，。l一‘’⋯、j、．一{．：，f研究生签名：自瓣帝师签章：锱德基F二级学院领导盖章：≮：轰，．!≯≯件年专月2了旷一”河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成

2、果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责ill负。研究生签名：弘舔雨导师签章：蔼参霸导师签章：<㈣砌，千年≥月刁日目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4研究论文血管紧张素II对体外培养人牙髓细胞生物学特性影响的实验研究前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．8日U舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．芍材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．13；口7K⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··1J附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．15附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．21讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．23结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。27参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．27综述与牙髓干细胞迁移相关趋化因子的研究现状⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯．'38个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．39中文摘要血管紧张素Ⅱ对体外培养人牙髓细胞生物学特性影响的实验研究摘要目的：通过组织块酶消化法进行人牙髓细胞的原代培养以获得大量可供实验用的牙髓细胞，建立人牙髓细胞的体外研究模型。研究不同浓度的AngII对体外培养人牙髓细胞增殖效应、细胞周期进程、迁移等一系列生物学活性的影响。方怯：1选取符合纳入标准的新鲜拔除健康牙(均经患者知情同意)，在无菌条件下拔出牙髓组织，通过组织块酶消化法进行牙髓细胞的原代培养，显微镜下观察组织块的解离情况，细胞的形态学表现和生长状态，待细胞生长融合达80％铺满瓶

5、底后，用O．25％胰酶消化按1：1进行细胞首次传代，以后传代按1：3比例进行，取生长状况良好的第4代人牙髓细胞，胰酶消化后制备成细胞悬液进行细胞爬片，用SABC法进行波形蛋白和角蛋白免疫组化染色鉴定细胞来源。HE染色观察细胞的组织学形态。2取生长状态良好的第4代人牙髓细胞，0．25％胰酶消化，用含15％胎牛血清的DMEM培养液重悬细胞，调整细胞悬液的浓度为2x104个／ml，接种于96孔板，每孔加液量200“L。随机分为五个实验组和一个对照组，每组复五孔。恒温培养箱内培养24h，弃孔内原培养液，PBS缓冲液冲洗3遍。在相应实验组的孔内加入200止含5％胎牛血清的DMEM培

6、养液配制的AngII溶液(10’9mol／L、10一mol／L、10。7mol／L、10气noⅥ。、10≤mol／L)，对照组加入等量的含5％胎牛血清的DMEM培养液。放入培养箱内继续培养，于24h、48h、72h各取出一块96孔板，加入CCK-8溶液，370C恒温培养箱内孵育2h，酶标仪上450nm波长处测各孔吸光度值(oD值)。3取生长状态良好的第4代人牙髓细胞，用0．25％的胰蛋白酶消化后，1000r／min离,C．,5min，弃上清液，加完全培养液重悬细胞，调整细胞悬液的浓度为2×104个／ml，接种在25ml的培养瓶中，每瓶加液量3ml。随机分为两组，每组复三瓶

7、，培养箱中培养24h。弃瓶内原培养液，PBS缓冲液冲洗3遍，实验组相应的瓶内加入3ml含5％胎牛血清DMEM培养液配制的中文摘要10。7mol／LAngII溶液，对照组加入等量含5％胎牛血清的DMEM培养液继续培养牙髓细胞48h，消化，离心，收集细胞，加入．200C预冷70％的乙醇，40C过夜固定样本，按照细胞周期试剂盒说明书操作，应用流式细胞仪检测分析AngII对牙髓细胞的DNA合成，细胞周期进程的影响。4Transwell迁移实验。取生长良好的第4代人牙髓细胞，0．25％胰蛋白酶消化，1000r／min离心5min，弃上清