干扰素γ对口蹄疫病毒抑制作用的初步研究

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1、万方数据中图分类号UDC$852570硕士学位论文学校代码密级10533干扰素丫对El蹄疫病毒抑制作用的初步研究ThePreliminal3,ResearchontheAnti—virusEffectofInterferonGammaagainstFootandMouthDisease作者姓名：付银学科专业：生物学研究方向：生物化学与分子生物学学院(系、所)：生命科学学院指导教师：陈慧勇副教授论文答辩日期三：!±!!：兰!答辩委员会主席中南大学2014年5月万方数据原创性声明本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研

2、究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：彳寺哆岔学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或

3、部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：』j堡垦．．导师签名匿：丝重万方数据硕士学位论文中文摘要干扰素Y对口蹄疫病毒抑制作用的初步研究摘要：口蹄疫病毒是一种单链RNA病毒，可以导致偶蹄动物口蹄疫的发生，从而引发动物蹄部、舌部出现水泡。口蹄疫病毒包括7个血清型，至少65个亚型，变异性比较强，疫苗较难防治。干扰素丫是II型干扰素，可以抵抗病毒在机体的感染复制。本实验用PK．15细胞进行实验，用干扰素处理细胞后再感染口蹄疫病毒，来研究干扰素的抗病毒机制，以增

4、加宿主自身的抗病毒能力，增强机体的免疫性，以抵御病毒的感染。本研究利用表达谱测序来全面准确的研究干扰素对口蹄疫病毒的抵抗机制，共设立四个实验组：未加干扰素未感染口蹄疫病毒组(rFN．O)、加入5ng／mL干扰素未感染口蹄疫病毒组(IFN．5)、未加干扰素感染El蹄疫病毒组(FIFN．o)、加入5ng／mL干扰素感染口蹄疫病毒组(FIFN．5、)，将这四个组的RNA样品进行测序。测序显示IFN．0、FIFN．0、FIFN．5共同表达基因为14670个，占总基因数的57．9％。我们以FDR<0．05与基因表达倍数差异两倍以上作为阈值来

5、筛选不同处理组之间的差异表达基因。在FIFN．0与IFN．0组对比后发现：191个基因表达上调，124个基因表达下调；而将FIFN-5与FIFN-0比较，发现有133个基因上调，62个基因下调。GO显著性分析结果显示：IFN．0VSFIFN．0比较组，差异基因聚集在生物过程的负调节、细胞过程的正调节；而FIFN．0vsFIFN．5对病毒的反应，抗原加工递呈、免疫反应、防御反应等都是差异基因GO聚集富集较为明显的。Pathway显著性富集结果分析显示IFN．0VSFIFN．0比较组，p53途径差异基因富集较显著；而FIFN．0VSF

6、IFN．5组抗原加工递呈途径、吞噬体途径、补体系统差异基因富集较为显著。Westernblotting结果显示TAPl、OASl在FIFN．5表达升高，FIFN．0表达较低，以即在IFN-0、FIFN-5中剪接体较少，在FIFN．0中剪接体较多，也说明了未加干扰素感染口蹄疫细胞凋亡比较多。用实时荧光定量PCR对测序结果进行验证，根据GO及Pathway富集分析结果选取的九个基因：OASl、OAS2、MXl、腰盯，、RIG-I、CTGF、F3、RCANl初尸以U进行qPCR，发现这九个基因在不同样品中的表达趋势与测序趋势是相一致的，

7、说明测序结果是准确可信的。其中OASl、OAS2、MXl、唧r，、RIG-I在FIFN．5组表达升高较为明显，在FIFN．0中较低，这些基因又同属于干扰素诱导产生的基因，RIG-I的表达也促进了RIG．I通路的表达，CTGF、F3、RCANl万方数据硕士学位论文中文摘要和PLAU在FIFN-0组表达上调，在FIFN．5组中低表达，可能是病毒作用细胞后使细胞发生了凋亡。总的看来，加入干扰素后，抗原递呈能力，机体的免疫能力增强，抗病毒能力加强。本实验进一步扩增了TAPl基因的全长片段，并进行pcDNA3．1、pEGFP重组载体的构建，

8、为研究其在PKl5细胞中的抗病毒机制提供了材料。上述实验结果说明：PKl5细胞加入干扰素后可以通过提高先天性及适应性免疫反应能力，并能抑制细胞的凋亡，以增强对口蹄疫病毒的抵抗能力。关键词：口蹄疫病毒；干扰素丫；RNA．seq；GO富集分析；Path