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《鸦胆子油乳剂对小儿喉乳头状瘤细胞抑制作用的初步研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、第25卷第4期暨南大学学报(医学版)Vol.25No.42004年8月JournalofJinanUniversity(MedicineEdition)Aug.2004鸦胆子油乳剂对小儿喉乳头状瘤细胞抑制作用的初步研究1,2111江逊,曾耀英,狄静芳,何贤辉,112冯铮,曾山,陈文弦(1.暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室,广东广州510632;2.第四军医大学唐都医院耳鼻咽喉科,陕西西安710038)[摘要]目的:探讨鸦胆子油乳剂在体外对喉乳头状瘤细胞的抑制作用。方法:将不同质量浓度的鸦胆子油乳剂
2、加入体外培养的喉乳头状瘤细胞中,通过MTT法和流式细胞仪观察其对喉乳头状瘤细胞的抑制作用。结果:鸦胆子油乳剂对喉乳头状瘤细胞有明显的抑制作用,并且随药物质量浓度的增高及作用时间的延长而增强。结论:鸦胆子油乳剂对喉乳头状瘤细胞有明显的抑制作用,为临床小儿喉乳头状瘤术后应用鸦胆子促进康复提供了实验依据。[关键词]鸦胆子油乳剂;乳头状瘤;喉肿瘤[中图分类号]739.65[文献标识码]A[文章编号]1000-9965(2004)04-0408-05鸦胆子是苦科植物BruceaJavanica(L)Merr的成熟
3、果实,有毒。其毒性主要存在于水溶性苦味质部分,而其油脂部分无毒。最初在19世纪用于治疗阿米巴痢疾,近几十年来陆续报道[1~5]使用鸦胆子油乳剂治疗肺癌、膀胱癌、前列腺癌、食道癌及胃癌。儿童喉乳头状瘤迄今尚无根治办法,手术治疗仍为目前的首选,同时辅以有关药物(如干扰素、5-氟脲嘧啶、鸦胆子等),旨在达到去除肿瘤,减少复发,提高生存质量。本研究观察了鸦胆子油乳剂对体外培养的喉乳头状瘤细胞的抑制作用,为临床小儿喉乳头状瘤术后应用鸦胆子促进康复提供实验依据。1材料与方法111试剂与仪器鸦胆子油静脉乳剂(011m
4、g/mL,沈阳药科大学制药厂)、MTT(美国Sigma公司)、新生牛血清(杭州四季青生物材料研究所)、RPMI-1640培养基(美国GIBCO公司)、B-巯基乙醇(B-mercaptoethanol,B-Me)、二甲基亚砜(DMSO)为美国Sigma公司产品、羟乙基哌嗪乙硫磺酸(Hepes)、胰蛋白酶为华美公司产品、青霉素为哈尔滨制药总厂生产、链霉素为华北制药股份有限公司生产。FACSCalibur流式细胞仪为美国BectonDickinson公司产品。112喉乳头状瘤细胞的获取、培养及鉴定喉乳头状瘤细
5、胞的获取、培养及鉴定具体方法见参考文献[6],选择生长状态良好的第3[收稿日期]2004-03-03[基金项目]国家自然科学基金重点项目(No.30230350,39930230)及广东省/十五0重大科技专项资助项目(A302020204)[作者简介]江逊(1968-),女,在站博士后,主治医师,讲师,研究方向:组织工程及移植免疫.通讯联系人:曾耀英,Tel:85226219,E-mail:Tzengyy@jnu.edu.cn.第4期江逊等:鸦胆子油乳剂对小儿喉乳头状瘤细胞抑制作用的初步研究409代细胞
6、进行实验。113鸦胆子油乳剂对喉乳头状瘤细胞的细胞毒作用4采用MTT比色法,将对数生长期的喉乳头状瘤细胞(1@10/孔)加入96孔细胞培养板中,每孔200LL,37e体积分数5%CO2条件下培养24h。将鸦胆子油乳剂用质量分数10%RPMI1640细胞培养液稀释成不同的质量浓度(2、1、015、0125、01125、010625Lg/mL),分别加入实验孔中,另设不加药的阴性对照,每一质量浓度设6个复孔,继续培养12h和24h。每孔加入MTT20LL,孵育4h,去上清,加入150LLDMSO,振荡10m
7、in,按常规方法用酶标仪(BioRad,Model3550MicroplatReader)在490nm处测吸光度(A值),计算细胞抑制率(%)(细胞抑制率=(1-A实验组值/A对照组值)@100%)。每组细胞设6个正常对照孔,内加培养液,加样100LL/孔,不含细胞与药物。114流式细胞仪分析鸦胆子油乳剂对喉乳头状瘤细胞的细胞周期鸦胆子油乳剂(2、1Lg/mL)分别孵育喉乳头状瘤细胞12、24和48h,并以质量分数10%RPMI1640细胞培养液替代鸦胆子油乳作阴性对照,按时收集不同质量浓度处理的喉乳头
8、状6瘤细胞,胰酶消化,制成单细胞悬液,计数细胞>10/mL,PBS洗涤后,离心,加入-20e预冷的无水乙醇固定30min。离心除去乙醇,PBS洗涤,加入碘化丙啶溶液400LL,4e作用20min后,进行FACSCalibur流式细胞仪检测,资料均经LysisÒ软件收集和分析。115统计学处理数据以x?s表示,采用SPSS1110软件进行分析,所用统计方法为方差分析。2结果211鸦胆子油乳对喉乳头状瘤细胞生长的抑制作用不同质量浓度的鸦胆子油乳
