轮状病毒vp7抗原表位嵌合蛋白免疫学研究

《轮状病毒vp7抗原表位嵌合蛋白免疫学研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、硕士学位论文轮状病毒VP7抗原表位嵌合蛋白免疫学研究Immunoreactivit!I，ofrotavirusVP7pito[：himericIteinsOtrotaviruSVepltopeCmericproteins所院：姓名：指导教师：导师小组：学科专业：研究方向：完成日期：医学生物学研究所赵冰心陈元鼎研究员文喻玲副主任技师病原生物学分子病毒学及基因工程疫苗二零一四年五月中国医学科学院&北京协和医学院硕士研究生毕业论文目录摘要·⋯⋯⋯⋯⋯···⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1前’言．．．．．．．．．⋯⋯．．．．．．．．．⋯．．．．．．．．．

2、．．．⋯．．．．．．．．．．．⋯．．．．．．．．．．．．．．．．．．3刖青一”一一一⋯一”一一一一⋯一”一“一”一一．．一一”一⋯一一一”“一“一‘实验材料及方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯10一、实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··101．主要仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·102．主要试剂··········⋯·············································11二、实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··⋯131．pETP6重组质粒构建及鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·

3、⋯⋯⋯⋯⋯··132．pETP6v载体质粒的构建及鉴定⋯⋯⋯⋯···⋯⋯⋯⋯⋯⋯··163．含有VP6蛋白基因pETP6F载体质粒的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·244．携带RVVP7抗原表位重组表达质粒构建及鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯·245．重组VP6载体蛋白和重组嵌合蛋白VP6／EP的表达及检测⋯⋯⋯276．重组载体蛋白(rⅦ6F)和重组嵌合蛋白的纯化⋯⋯⋯⋯⋯⋯·277．Bradford法测定纯化蛋白的浓度⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯···278．MAl04细胞复苏与传代培养···⋯·⋯⋯⋯⋯⋯···⋯⋯···⋯·289．RV增殖·····⋯················

4、·⋯⋯···························2910．RV的纯化与浓缩⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·2911．微量滴定法测定SAIl与Wa病毒感染性滴度⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·2912．动物免疫及血清抗体的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3013．重组VP6载体蛋白和重组嵌合蛋白免疫血清中和抗体效价的检测··3014．Westernblot检测纯化的重组嵌合蛋白的免疫原性⋯⋯⋯⋯⋯··31结果与分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯321．质粒的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··322．重组嵌合蛋白的表达及PAGE检测⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯353．重组嵌合蛋白的纯化及PAGE检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36中国医学科学院&北京协和医学院硕士研究生毕业论文4．纯化蛋白浓度的测定···⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·375．RV感染性滴度的检测-···⋯·⋯⋯⋯··⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··386．免疫动物血清中和抗体检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯-387Westernblot检测重组嵌合蛋白的免疫原性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·39讨论．··⋯⋯⋯⋯⋯·．．··⋯·⋯⋯．·．．··⋯⋯⋯．．·．．··．．··．．⋯···．······43d、结···········．．·············

6、··············．····························⋯··45参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··46附录··············⋯··-···-············-·····⋯·········⋯⋯··············50(一)缩略词⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯50(二)主要溶液配方⋯··⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··52(三)主要实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯·····⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯59(四)TB-Chen株VP6编码基因核苷酸序列及氨基酸序列⋯⋯⋯⋯··⋯65(五

7、)TB-Chen株VP6F载体编码基因核苷酸序列⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·66致谢··································································⋯····67研究生简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··68独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··OO0⋯⋯·69学位论文版权使用授权书⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·69中国医学科学院&北京协和医学院硕士研究生毕业论文轮状病毒VP7抗原表位嵌合蛋白免疫学研究摘要轮状病毒(Rotavirus。RV)是引起人类、哺乳动物类、禽类

8、病毒性腹泻的主要病原体。几乎全世界每一个儿童都被RV感染过，每年有大量儿童因为感