日本沼虾核rdna内转录间隔区（its-1）全序列的测定及分析

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1、Y12≥5217南京爱鼍戈蓬硕士学位论文分类号Q12学号2Q业≥≥≥螋§日本沼虾核rDNA内转录间隔区(ITS．1)全序列的测定及分析王庆指导导师傻湛拓班宜虽专业名称丞生生塑堂——研究方向生塑挂盔答辩日期三QQ盘生盔旦中文摘要日本沼虾核rDNA内转录间隔区(ITS一1)全序列的测定及分析摘要日本沼虾(Macrobrachiumnipponense)，俗称青虾、河虾，在动物分类学上属节肢动物门、甲壳纲、十足目、长臂虾科、沼虾属。日本沼虾在我国分布很广，具有生长快、繁殖力强、适应性广等特点，是目前淡水养殖业中重要的养殖对象和最有发展前途的品种之一。但近年来，日本沼虾的性状出现了退化，包括

2、性早熟、规格变小、商品率低、抗病能力下降等，极大的影响了日本沼虾养殖业的效益。要实现日本沼虾养殖业的可持续发展，迫切需要对日本沼虾进行资源保护和遗传改良，而对日本沼虾进行遗传背景分析，研究其遗传分化情况，则是资源保护和遗传改良的基础。核r劭怆的内转录间隔区(ITS)是由18S和5．8SrRNA之间的ITS．1片段和5．8S和28SrRNA-#__间的ITS．2片段组成。由于ITS区不加入成熟核糖体，所以受到的选择压力较小，变异丰富。另一方面，18s，5．8s和28SrDNA的高度保守性，能较方便地设计出上下游引物，而使PCR扩增得以实现。利用ITS序列的丰富变异性，可AkDNA水平来

3、分析个体问和种群问的遗传变异，为遗传育种提供背景知识。本文将ITS分析技术应用到淡水虾类的遗传研究中，对日本沼虾进行DNA水平的遗传分析。在筛选合适的引物的基础上，采用聚合酶链式反应(PCR)技术对日本沼虾的核rDNA的内转录间隔区的ITS一1进行了扩增，电泳检测得到了一条清晰的扩增产物条带。PCR产物纯化后经T载体连接、克隆和测序，用DNAStar软件拼接处理后得到长度为1763bp的日本沼虾ITS．1序列，是迄今已报道的最长的ITS一1序列，其中A，T，G，C平均含量分别为29．92％、27．71％、28．36％、14．26％，G+C的含量42．44％。日本沼虾ITS一1全序列中

4、存在多个重复序列，其中T11ATTAAAGAAGAAA重复6次，3处存在(GA)。重复序列，分别重复5次，6次，5次；序列比对发现共有13处碱基转换，9处碱基颠换；共发现4处存在碱基缺失，分别缺失T、GAGA、ATAAAGAGAGAAAllTxTAAAGAGAGAAll可和CAGCAGCAG；发现碱基插入2处，分别插入A和GAGAAATTTTGAAAGAGAGA。本文工作填补了日本沼虾ITS序列研究方面的空白，丰富了日本沼虾遗传背景资料，可为日本沼虾遗传育种研究提供参考。III日本沼虾核rDNA内转录间隔区(ITS·1)全序列的测定及分析关键词：日本沼虾；ITS；序列测定；遗传多样性

5、；rDNAIV英文摘要SEQUENCINGANDANALYSISOFNUCLEARRDNAINTERNALTRANSCRIBEDSPACERS(ITS-1)OFABSTRACTMacrobrachiumnipponense，alsonamedriverprawn，belongstoArthopoda，Crustacean，Decapoda，Palaemonide，Macrobrachiumintaxonomy．MacrobrachiumnipponensewidelydistributedinChinaandcharacterizedbyrapidgrowth，strongrepro

6、ductionandextensiveadaptabilitywasanimportantbreedinfreshwateraquacultureandoneofthemostproductivespecies．MacrobrachiumnipponenseisoneofimportantfreshwaterspeciesforaquacultureinChina．However,seriousretrogressionofeconomictraitsappearedrecentlyinMacrobrachiumnipponenseculture，suchasprematuratio

7、n，smallsize，lowmarketingrateweakdisease．resistancewhichgreatlylowereditsprofits．InordertorealizethesustainabledevelopmentofMacrobrachiumn]ppoylcnseculture；it'snecessarytoearlyoutresourcesprotectionandgeneticimprovementandinvestiga