低温冷冻对黄颡鱼精子蛋白与显微结构的影响

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1、万方数据温少tt医科大学硕士学位论文答辩委员会主席：王挂查答辩委员会成员：王挂皇盐握垄袒建送万方数据温州医科大学硕士学位论文目录中英文缩略语对照袁⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．2Abstract⋯⋯⋯⋯．⋯．．．⋯⋯．⋯．⋯．⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯．⋯．⋯．．．⋯．⋯．⋯⋯⋯．⋯．⋯⋯5第一章前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．81．1细胞膜及脂筏微域⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯91．2胆固醇⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．101．3

2、脂筏蛋白Flotillin．1，Flotillin．2和Caveolin．1简介⋯⋯⋯．．101．4能量代谢相关蛋白的简介⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯111．5热应激蛋白HSP90和HSP70简介⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．131．6本实验研究内容⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．141．6．1超低温冷冻保存对脂筏蛋白、代谢相关蛋白及热应激蛋白表达的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．141．6．2胆固醇的导入与剔除对精子质量的影响⋯⋯⋯⋯⋯．．141．613胆固醇的导入与剔除对脂筏蛋白、代谢相关蛋白及热应激蛋白的表达影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．141．6．4超低温冷冻对于精子形态的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯14第二章低温冷冻及不同冷冻速率对蛋白的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯152．1实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．152．1．1精子样本的采集与处理⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯152．1．2主要试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯15万方数据温州医科大学硕士学位论文2．1．3主要仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯162．2实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．162．2．1精子的冷冻、保存及解冻⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯162．2

4、．2精子活力及浓度的测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯162．2．3精子的解冻与蛋白提取⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯172．2．4Westernblot检测蛋白⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．172．2．5数据处理⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯172．3实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．172．3．1低温冷冻前后精子活力的情况⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯172．3．2低温冷冻对冻精及鲜精中三种脂筏蛋白的影响⋯⋯⋯182．33低温冷冻对冻精及鲜精中代谢相关蛋白的影响⋯⋯⋯192．3．4低温冷冻对冻精及鲜精中热应激蛋白的影响⋯⋯⋯⋯23

5、2．4分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．24g--章胆固醇的导入与剔除对精子质量及蛋白的影响⋯⋯⋯⋯⋯273．1实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．273．1．1精子样本的采集与处理⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯273．1．2主要试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯273．1．3主要仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯273．2实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．283．2．1胆固醇搭载环糊精复合物的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯283．2．2胆固醇的导入⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28

6、万方数据温州医科大学硕士学位论文3．2-3胆固醇的剔除⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯283．2．4精子的冷冻及解冻⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯293．2．5精子活力及浓度的测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯293。2．6黄颡鱼冻精ATP含量的测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．293．2．7黄颡鱼冻精MDA含量的测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯303．2．8黄颡鱼冻精ROS含量的测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．303．2．9精子的解冻与蛋白提取⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯303．2．10Westernblot检测蛋白⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．303．2．

7、11数据处理⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．313．3实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．313．3。1胆固醇的导入与剔除对冻精活力的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯313．3．2胆固醇的导入与剔除对冻精ATP的影响⋯⋯⋯⋯⋯．．323．3．3胆固醇的导入与剔除对冻精MDA的影响⋯⋯⋯⋯⋯323．3．4胆固醇的导入与剔除对冻精ROS的影响⋯⋯⋯⋯⋯．．333．3．5胆固醇的导入与剔除对冻精及鲜精中三种脂筏蛋白的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯343．3．6胆固醇的导入与剔除对冻精及鲜精中代谢相关蛋白的

8、影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯353．3．7胆固醇的导入与剔除对冻精及鲜精中热应激蛋白的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯