阳离子多肽--硬脂酸嫁接物基因给药系统研究

《阳离子多肽--硬脂酸嫁接物基因给药系统研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、万方数据分类号：R94中文论文题目：洳≥：j～嘧硕士学位论文⑧学号：21119018：多∈文’ijc}文题目：苎兰坚堕i竺墨Q望垒塾曼卫丛i卫塾逊￡￡垒!iQ旦i竺卫竺卫童i照曼．stearateforgenedelivery．．．万方数据论文评阅人1：评阅人2：评阅人3：评阅人4：评阅人5：⑧论文作者签名：指导教师签名：茎±兰!丝答辩委员会主席：遗釜垩』熬拯』逝江太堂委员1：莹坚』熬拯』逝洹太堂委员2：王胜造』丑究员』逝洹鲞医堂型堂医委员3：委员4：委员5：万方数据浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学

2、位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得浙江太堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者始龟捅签字隰加I叶州删日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解浙江太堂有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权浙鎏太堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，

3、可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：蚕既西锰导师签名：签字日期：∞f牛年。乡月乡J日签字日期：批。]I孙I忻岁月万方数据浙江大学硕士学位论文致谢本研究是在导师杜永忠教授的悉心指导下完成的。杜老师丰富渊博的专业知识、认真严谨的治学态度和崇高忘我的敬业精神，深深地感染了我，使我不断提高科研技能，完善专业知识，培养独立分析和解决问题的能力。杜老师不仅在学业上给我以精心指导，同时还在思想、生活上给我以无微不至的关怀，在此谨向杜老师致以诚挚的谢意和崇高的

4、敬意。在近三年的科研工作中，胡富强教授、袁弘教授、游剑教授和李洁老师为我们创造了良好的科研环境及学习氛围。老师们给予了大力支持和帮助，在此向诸位老师深深地鞠上一躬。本论文还得到了课题组师兄师姐的帮助，在此一并致谢。我还要感谢课题组的所有兄弟姐妹们，是你们让我两年半的科研生活变得丰富多彩。你们在生活和学习上给予的关心和帮助，让我深深感受到家的温暖。遇到问题后的讨论交流，使我感受到集体的智慧和团结合作的重要性，同时使我敢于直面挫折，勇于迎难而上。在这里请接受我最诚挚的谢意!最后，感谢我的家人，谢谢你们的默默支持，促使我顺

5、利完成学业。单纯蕾2014年1月15日万方数据浙江大学硕士学位论文中文摘要阳离子多肽一硬脂酸嫁接物基因给药系统研究浙江大学药学院药剂学2011级硕士研究生单纯蕾导师杜永忠教授中文摘要阳离子多肽．硬脂酸嫁接物具有较丰富的正电荷，可通过静电作用与质粒DNA(plasmidDNA，pDNA)进行复合，为实现有效的体外基因转染和体内抗肿瘤疗效提供了极大的可能性。本研究构建了阳离子多肽．硬脂酸／pDNA复合物和聚乙二醇修饰多肽．硬脂酸@DNA复合物基因给药系统，考察了其基本理化性质，体外转染效率，体内抗肿瘤疗效以及细胞内涵体逃

6、逸过程。阳离子多肽-硬脂酸嫁接物(cationicpeptidestearate，STR-Pep)系通过多肽氨基末端的氨基与硬脂酸羧基发生酰胺化反应共轭连接而成，醛基化聚乙二醇则通过醛基与多肽赖氨酸残基上的游离氨基发生反应而生成聚乙二醇修饰的多肽．硬脂酸嫁接物(PEGmodifiedcationicpeptidestearate，PEG—STR-Pep)。以核磁共振氢谱确证两种嫁接物的化学结构，芘荧光法测定临界胶束浓度，透射电镜观察胶束的粒径以及形态学特征，噻唑蓝法考察嫁接物细胞毒性。分别制备STR-Pep／pDNA

7、复合物和PEG—STR-Pep／pDNA复合物，以透射电子显微镜观察复合物的粒径及形态特征，水平凝胶电泳分析嫁接物胶束与DNA的密接程度。以pEGFP．Cl作为报告基因，HEK293，SKOV．3，MCF．7，Hela细胞为模型细胞，以荧光倒置显微镜观察嫁接物胶束介导的绿色荧光蛋白表达，并以流式细胞仪定量测定其转染效率。以pGL．3质粒为报告基因，定量考察嫁接物胶束介导的体外转染水平。同时，考察了STR-Pep／pDNA和PEG．STR-Pep／pDNA基因给药系统的体外细胞转染毒性。为了进一步确证多肽中组氨酸的促内

8、涵体逃逸作用，以6．羧基荧光素(FAM荧光)标记pDNA，以Lyso．Tracker标记细胞内内涵体和溶酶体，观察由STR．Pep携载的pDNA在细胞内实现内涵体逃逸的过程。以荷SKOV-3裸鼠为模型动物，以pPEDF(plasmidofpigmentepithelium-derived万方数据浙江大学硕士学位论文中文摘要factor)为治疗基