甘苦口服液的研制及其抗肝纤维化药效学的实验研究

《甘苦口服液的研制及其抗肝纤维化药效学的实验研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、南方医科大学2009级博士学位论文甘苦口服液的研制及其抗肝纤维化药效学的实验研究ThepreparationofGanKuoralliquidandpharmacodynamicsexperimentaistudyontreatmentofhepaticfibrosis课题来源：自选课题专业名称药理学学位申请人指导教师答辩委员会主席答辩委员会成员黄亮陈志良教授程国华教授方永奇教授陶涛教授吴青业教授王春霞教授论文评阅人侯连兵教授余林中教授吴晓松教授2012年5月10日广州／恻蚴科攀博士学位论文甘苦口服液的研制及其抗肝纤维化药效学

2、的实验研究博士研究生：黄亮指导教师：陈志良摘要研究背景和目的各种肝病所致的肝纤维化严重危害人类健康，给家庭、社会带来沉重的负担，研究开发治疗肝纤维化的药物、特别是中药具有重要的社会、经济意义。将中医药理论与现代药理学研究成果结合起来，结合古今临床实践，筛选出能治疗肝纤维化的中药，提取活性成分将之组合成方，然后进行实验研究及临床试验的方法，是研究开发中药新药的一种行之有效的手段。因此，在这种思想的指导下，笔者考察了大量的中医古代文献、现代研究文献及国内外现代药理学研究成果，筛选出甘草、苦参两昧中药。甘草补脾益气，清热解毒，祛痰止

3、咳，缓急止痛，调和诸药。用于脾胃虚弱，倦怠乏力，心悸气短，咳嗽痰多，脘腹、四肢挛急疼痛，痈肿疮毒，缓解药物毒性、烈性，有效成分为甘草甜素；苦参清热燥湿，杀虫，利尿，用于热痢，便血，黄疸，尿闭，有效成分为苦参碱。现代药理研究表明二者皆有保肝、抗炎，抗病毒等治疗肝纤维化的作用。临床资料显示，甘草甜素联合苦参碱静脉滴注对于慢性乙型肝炎治疗效果良好。但是慢性疾病需要长期服用药物，静脉滴注，患者顺应性差。因此笔者选择研究甘草甜素和苦参碱联合口服给药治疗肝纤维化，将二者有效活性成分组合成方，命名为甘苦口服液。为了研究甘苦口服液抗肝纤维化的

4、作用效果，本课题首先对两者的配伍进行筛选，选择出最佳配比，制备成口服液。进行HPLC测定甘苦口服液中甘草酸铵和苦参碱的含量进行方法学考察，确定检测条件；对甘苦口服液的稳定性进行考察，观察其各种环境下外观、PH值、相对密度和含l摘要量的改变；采用急毒试验考察甘苦口服液的安全性。最后，对甘苦口服液进行抗肝纤维化的药理效应及作用机理进行研究，为以后的临床试验奠定实验基础。方法1．采用四氯化碳(cch)、硫代乙酰胺(TAA)和异体猪血清三种方式，对SD大鼠腹腔注射给药，模拟肝纤维化模型。并对这三种动物模型的血清ALT，AST，HA和肝

5、匀浆SOD和MDA检测，取肝组织进行HE染色，分别观察肝组织的损伤程度和胶原增生的情况等进行比较。2．运用L蚣诱导大鼠肝纤维化模型，采用均匀设计法(二因素五水平)分组实验，并设有正常组，模型组，以大鼠肝组织Hyp含量作为检测指标，经均匀设计软件3．0处理分析得最佳处方；运用相同方法诱导大鼠肝纤维化模型，设正常组，模型组，．秋水仙碱组，最佳处方组，通过观察肝组织羟脯氨酸含量，大鼠血清HA，ALT，AST，ALB含量以及肝组织纤维化变化，对于最佳处方的疗效进行比较和验证实验。找到最佳处方后，按照最佳处方制备成甘苦口服液。3．建立H

6、PLC法测定甘苦口服液的含量，进行方法学考察。稳定性实验法，按各法分别检测样品的澄明度，PH值，相对密度等，并采用HPLC法测定复方中甘草甜素和苦参碱含量。4．以预实验结果，在最大剂量840mg／kg，最小剂量141．3mg／kg之间，设置6组，每组10只小鼠，一次性灌胃后观察14天，记录实验结果。解剖观察死亡小鼠的心、肝、肾和脑等主要器官，做病理切片HE染色观察。采用Bliss统计软件包进行统计分析，采用Probit回归计算甘苦口服液对小鼠的LD50。5．大鼠设正常组，模型组，以苦参碱计，甘苦口服液高(140mg／kg)，中

7、(70mg／kg)，低(35mg／kg)剂量组，中剂量(70mg／kg)预防组，阳性对照美能(70mg／kg)组。除正常组外，其他按模型制备方法腹腔注射TAA，中剂量预防组同时给予合剂，四周后模型组与正常组生理盐水灌胃，其他五组分别给药。第八周末次给药后，禁食，第二天麻醉大鼠，腹主动脉采血，取血清，并取肝脏，做以下Ⅱ博士学位论文检测项：1)肝功能血清生化指标ALT、AST、ALB、G。2)肝纤维化指标：HA、LN、PC．III。3)细胞因子：TNF—a、TGF-pl、IL·13。4)新鲜肝组织匀浆MDA、SOD、Hyp。5)H

8、E染色，Masson胶原染色。6)I型、ⅡI型胶原蛋白、Gt．SMA、TIMP．1免疫组织化学染色。统计学处理计量资料以均数4-标准差(又士s)表示。缺失值的处理：剔除分析所涉及变量中带缺失值的观察单位。用SPSSl3．0软件进行数据分析。对随机设计的多样本资料进行单因素方差