柴胡疏肝散抗肝纤维化的实验研究

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1、柴胡疏肝散抗肝纤维化的实验研究作者：付德才杨世忠宋祥福【摘要】目的探讨柴胡疏肝散对肝纤维化大鼠模型αSMA、TGFβ1的影响及其抗纤维化的机制。方法采用40%CCl4皮下注射，制备肝纤维化模型并以柴胡疏肝散干预，测定肝功能、血清透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)及肝组织羟脯氨酸(HYP)，光镜观察肝组织病理变化，免疫组织化学法检测肝组织αSMA、TGFβ1表达，RTPCR检测TGFβ1mRNA的表达。结果柴胡疏肝散组较模型组:肝功能明显改善，血清HA及LN显著降低，肝组织HYP含量明显少，肝组织纤维化程度明显改善，肝组

2、织αSMA及TGFβ1表达减少。结论柴胡疏肝散对CCl4诱导的大鼠肝纤维化有良好的防治作用。【关键词】柴胡疏肝散；肝纤维化；αSMA；TGFβ1　　近年来柴胡疏肝散抗肝纤维化的临床研究取得了较好的临床效果〔1〕，但目前国内外尚无柴胡疏肝散抗肝纤维化的基础研究。本实验采用四氯化碳(CCl4)大鼠肝纤维化模型,观察柴胡疏肝散的抗肝纤维化作用,并探讨其对α平滑肌肌动蛋白(αSMA)、转化生长因子(TGFβ1)影响及柴胡疏肝散抗肝纤维化的理论机制。　　1材料与方法　　11材料　　111动物及药物雄性22月龄A试剂盒购自北京

3、中杉生物公司，兔抗大鼠TGFβ1多克隆抗体购自武汉博士德生物工程有限公司，即用型SP免疫组化试剂盒购自福州迈新试剂公司，DAB购自北京中山生物公司，RTPCR两步法试剂盒购自TAKARA公司，Trizol购自Sangon公司。　　12方法　　121模型制作参照　　2结果　　21各组大鼠肝功能改变模型组ALT、AST显著升高,ALB显著降低；干预组ALT、AST较模型组明显降低,ALB则显著升高。见表1。　　表1大鼠血清肝功能的变化（略）　　与模型组比较：1)P＜005，与正常组比较：2)P＜001　　22各组大鼠血

4、清纤维化检查结果与正常组相比,模型组大鼠肝纤维化各项指标明显升高(P＜001)，柴胡疏肝散干预组与模型组比较，HA、LN及PCⅢ明显降低(P＜001)，但未达到正常对照组的水平。肝组织HYP含量模型组与正常组相比明显升高(P＜001)，柴胡疏肝散干预组与模型组比较，明显降低(P＜001)。见表2。　　表2各组大鼠血清HA、LN、PCⅢ含量变化（略）　　与模型组比较：1)P＜001，与正常组比较：2)P＜001　　23组织形态学改变肝脏HE染色显示,正常大鼠可见少量胶原着色,病理模型组肝小叶结构破坏,纤维组织增生明显,将

5、肝小叶分隔成大小不等的肝细胞团,肝细胞广泛变性坏死,汇管区扩大、胶原沉积。柴胡疏肝散干预组肝细胞有不同程度的变性坏死,汇管区及小叶间有少量纤维组织增生,纤维间隔细小,与模型组比较差异显著。秋水仙碱干预组肝细胞有不同程度的变性坏死,汇管区及小叶间有少量纤维组织增生，肝细胞内可见脂肪沉积。统计分析，柴胡疏肝散干预组及秋水仙碱干预组较模型组纤维化程度较轻(P＜005)，Masson染色胶原面积:模型组与柴胡疏肝散干预组相比分别为与(129±06)%和(62±04)%，柴胡疏肝散干预组较模型组为低(P＜001)。见表3。　　表3

6、大鼠肝纤维化的分级（略）　　与模型组比较：1)P＜005,与正常组比较：2)P＜001　　24免疫组化结果正常组肝组织中几乎不表达TGFβ1，模型组TGFβ1阳性细胞主要位于中央小叶和门静脉周围纤维带及肝纤维间隔中,主要见于Kuffer细胞、类间质细胞质及其周围，柴胡疏肝散干预组阳性染色程度均较模型组明显减轻(P＜001)。αSMA在胞浆表达，正常对照组只表达于小动脉及小静脉，在胆管无表达。模型组αSMA主要表达于汇管区及纤维间隔，且呈长椭圆形或梭形。实验表明模型组αSMA免疫组织化学染色面积明显升高，显著高于正常

7、组(P＜001)。柴胡疏肝散治疗组及秋水仙碱干预组明显低于模型组(P＜005)。见表4。　　表4各组大鼠肝组织TGFβ1及αSMA表达的变化（略）　　与模型组比较：1)P＜005,与正常组比较：2)P＜001　　25RTPCR检测正常肝组织几乎不表达TGFβ1mRNA，而模型组为强表达，TGFβ1/GAPDH比值为084±017，远高于正常组(P＜001)；柴胡疏肝散干预组TGFβ1/GAPDH比值为057±014，TGFβ1mRNA表达低于模型组(P＜005)。αSMAmRNA模型组表达较正常

8、组明显增强，比值为097±015(P＜001)；柴胡疏肝散干预组比值为062±023，与模型组比较(P＜001)。　　3讨论　　目前的研究认为，肝纤维化的病理改变是细胞外基质(ECM)的增生和降解失衡所致，而病理情况下细胞