arid1a在人脑胶质瘤中的表达及对其生物学行为影响

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1、中图分类号R鱼51UDC61O博士学位论文学校代码!Q5三3密级公珏ARIDlA在人脑胶质瘤中的表达及对其生物学行为影响TheexpressionofARID1Ainhumangliomasandtheeffectonitsbiologicalbehavior作者姓名：曾瑜学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：临床医学神经外科学湘雅医院刘运生教授论文答辩日期2司塑鞋目么囝答辩委员会主中南大学2013年5月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表

2、或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。ARIDlA在人脑胶质瘤中的表达及对其生物学行为影响摘要：背景：胶质瘤

3、是中枢神经系统中最常见的恶性肿瘤，尽管目前在外科切除，放化疗及其他生物学治疗上取得了一些进展，但其预后仍然很差。所以，深入研究其发生发展的细胞及分子机制具有重大现实意义。SWI／SNF(mating-typeswitching／sucrosenon．fermenting，交换型转换／蔗糖不发酵复合物)是一种进化保守的多亚基单位的染色质重塑复合物，它能够利用ATP水解产生的能量动员核小体，使染色质重构，从而调节靶基因的转录。染色质重塑复合物如果发生突变，可导致染色质不能重塑，影响基因的正常表达，导致人类疾病。如果突变引起抑瘤基因异常将导致癌症。ARIDlA(ATrichi

4、nteractivedomain1A，AT丰富结合域1A)是目前研究最热门的SWI／SNF亚基单位。位于人染色体的lp36．11域，在肝癌、胃癌、卵巢癌、子宫内膜癌、乳腺癌等肿瘤中起着抑瘤基因的作用，但它在人脑胶质瘤组织中的表达情况及对胶质瘤的生物学影响目前国内外均无相关报道。目的：探讨ARIDlA基因在人脑胶质瘤组织中的表达情况及与病理分级的关系。构建ARIDlA真核表达载体，为后续实验提供基础。探讨ARIDlA对胶质瘤细胞生长、增殖、侵袭、凋亡等多种生物学特性的影响及其对胶质瘤细胞生长增殖、侵袭的作用机制。方法：收集55例新鲜胶质瘤和5例新鲜脑组织标本，用定量RT．

5、PCR及westernblot分别检测胶质瘤和脑组织中ARID1AmRNA与蛋白表达差异，及它们的表达水平与胶质瘤病理分级的关系。将ARIDlA克隆入pCDNA3．1(+)．ARIDlA真核表达载体酶切及DNA测序鉴定。用Lipofectamin脂质体法将重组pCDNA3．1(+)．ARIDlA转II染人U87胶质母细胞瘤细胞株，并使用定量RT—PCR及westernblot验证效果。分别使用MTT、Transwell侵袭实验、流式细胞仪等多种技术检测ARIDIA对U87细胞的生物学影响。使用定量RT．PCR及westernblot技术对c．MYC基因、MMP．2、MM

6、P．9及P13K信号通路的下游蛋白pAKT和pS6K检测，研究这些基因在转录和翻译水平的变化。结果：1、与正常脑组织相比，胶质瘤中ARIDlAmRNA及蛋白的表达明显降低(P0．05)。2、转染ARIDlA真核表达质粒后，ARIDlA过表达组胶质瘤细胞中该基因的mRNA表达量上调约2．59倍，蛋白表达量上调近3倍，与对照组相比，差异有统计学意义(尸

7、IDlA过表达组胶质瘤细胞增殖率下降约25％，与U87组及U87．vector组之间的差异有统计学意义俨