prex2a在人脑胶质瘤中的表达及对其生物学行为影响

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1、中图分类号R651UDC610学校代码密级10533PREX2a在人脑胶质瘤中的表达及对其生物学行为影响TheexpressionofPREX2ainhumangliomasandtheeffectonitsbiologicalbehavior论文答辩日期作者姓学科专研究方学院(系、指导教刘亮临床医学神经外科学湘雅医院刘运生教授答辩委员会主中南大学2013年5月名业向所师原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南

2、大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共NT_作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者虢驻吼一年一月一日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：墟导师签名——日期：——年一月一日PREX2a在人脑胶质瘤中的表达及对其生物学行

3、为影响摘要目的：胶质瘤是颅内最常见的原发性恶性肿瘤。PREX2a(phosphatidylinositol-3，4，5一trisphosphatedependentRacexchangefactor2a，磷脂酰肌醇．3，4，5．三磷酸依赖的Rac交换因子2a)是一种鸟氨酸交换因子(GEF)，参与Rac鸟苷三磷酸酶(GTPase)的催化过程。PREX2a在多种肿瘤中的表达明显升高，提示可能参与恶性肿瘤的发生和发展。然而，目前关于PREX2a在胶质瘤发生、发展过程中的作用及相关分子机制尚不清楚。本研究检测正常脑组织及世界卫生组织(WorldHealthOrganizat

4、ion，WHO)评定的I．IV级胶质瘤中PREX2a的表达，以初步探讨PREX2a与胶质瘤病理级别的关系；进而利用RNA干扰技术，下调PREX2a在胶质瘤细胞系SWO．38中的表达，深入研究胶质瘤细胞在PREX2a下调后的生物学特性(增殖、凋亡、细胞周期和侵袭能力)及相关作用机制。方法：1、荧光RT．PCR与WesternBlot检测正常脑组织与WHOI．IV级胶质瘤组织中PREX2a的mRNA和蛋白表达水平。2、利用PREX2a特异性的siRNA，干扰胶质瘤细胞系SWO．38中PREX2a的表达，并用荧光RT—PCR与WesternBlot检测干扰效果。3、MTT

5、法检测PREX2a下调后，胶质瘤细胞系SWO．38的细胞增殖能力。4、流式细胞检测PREX2a下调后，胶质瘤细胞系SWO．38的细胞凋亡水平。5、流式细胞检测PI冱X2a下调后，胶质瘤细胞系SWO．38的细胞+周期情况。6、TRASWELL实验检测PI江Ⅺa下调后，胶质瘤细胞系SWO．38的侵袭能力。7、WesternBlot检测PI迮)(2a下调后，胶质瘤细胞系SWO一38中PTEN、Akt、mTOR的磷酸化水平。结果：1、与正常脑组织相比，胶质瘤中PREX2amRNA及蛋白的表达明显升高，且随着胶质瘤病理级别的上升，PREX2a的表达呈升高趋势。正常组与I级之间

6、，III级与IV级之间无统计学差异(尸>O．05)。其余任意两组间差异均有统计学意义(尸O．05)。2、PREX2a特异性siRNA转染SWO．38后，细胞中PREX2a的mRNA水平下调约78％。PREX2a的蛋白表达水平下调约72％，提示干扰成功。3、PREX2a下调后，胶质瘤细胞系SWO．38的细胞增殖能力下降约32％，与对照组之间的差异有统计学意义(P

7、91％±O．12％、3．04％±O。14％、11．87％±0．46％。PREX2a干扰组与另外两组相比，差异有统计学意义(P