hes1和hes5表达与人神经胶质瘤细胞增殖能力相关性地研究

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1、福建医科大学硕士研究生毕业论文Hesl和Hes5表达与人神经胶质瘤细胞增殖能力相关性的研究中文摘要目的：1、探讨Notchl受体和其下游信号分子Hesl、Hes5在神经胶质瘤中表达特点和相互关系；2、构建Hesl、Hes5基因RNAi慢病毒载体，筛选获得Hesl、Hes5沉默的神经胶质瘤细胞株；3、观察Hesl、Hes5基因沉默对神经胶质细胞U251增殖的影响，初步探讨Notch-Hes信号通路调控神经胶质瘤增殖的可能机制。方法：1、应用免疫组织化学方法检测人脑星形细胞瘤和正常人脑组织中Notchl和Hesl、Hes5表达情况；。2、设计、合成针对靶基因HesI、Hes5的shRNA编码

2、序列，将其克隆到pENTR／U6RNm入门载体，经瞬时转染筛选获得有效的靶序列。将含有Hesl、Hes5有效干扰序列的入门载体与pLenti6／BLOCK-iTTM-DEST目的载体通过GatewayLR重组构建出相应的shRNA慢病毒表达载体，经293FT细胞包装获得慢病毒颗粒。通过慢病毒转导U251细胞后，筛选获得Hesl、Hes5基因沉默的U251细胞株；3、采用MTT法，平板克隆形成实验，流式细胞术检测Hesl、Hes5基因沉默对U251细胞增殖及细胞周期的影响。结果：l、人脑星形细胞瘤中Notchl、Hesl和Hes5的表达均显著强于正常脑组织：在不同病理分级的星形细胞瘤中，I

3、I"--HI级组Notchl和Hesl的表达水平显著高于Ⅳ级星形细胞瘤组，Hes5的表达在两组间无显著性差异。星形细胞瘤中Notchl与Hesl的表达有较好的一致性，与Hes5的表达一致性较差。2、成功筛选出Hesl、Hes5基因特异、有效的RNA干扰靶点，构建了针对Hesl、Hes5基因特异性shRNA慢病毒表达载体，并在293FT细胞中包装获得慢病毒颗粒，病毒滴度分别为8．4x104TU／ml、7．2x104TU／ml。4福建医科大学硕士研究生毕业论文3、建立了Hesl、Hcs5基因稳定沉默的神经胶质瘤U251细胞株。4、沉默Hesl或Hes5均能明显抑制U251细胞增殖及克隆形成能

4、力。结论：1、Notchl表达与星形细胞瘤的发生有关，与星形细胞瘤的病理分级无关。Notchl可能主要是通过下游分子Hesl而非Hes5发挥作用。2、构建的Hesl、Hes5特异性RNAi慢病毒表达载体能有效抑制胶质瘤细胞U251中Hesl、Hes5基因的表达，可作为研究Notch-Hes信号通路及其与胶质瘤关系的重要技术手段。3、Hesl、Hes5与胶质瘤细胞的增殖密切相关，在体外Hesl、Hes5特异性RNAi能够抑制胶质瘤细胞U251的增殖能力。关键词：神经胶质瘤；Notch信号通路；Hesl；Hes5；RNA干扰；慢病毒福建医科大学硕士研究生毕业论文StudiesontheSig

5、nificanceofHeslandHes5ExpressionsRelatedtotheProliferationofHumanGliomaCellsAbstractObjective：1、ToinvestigatethesignificanceoftheexpressionsofNotchl，Hesl，Hes5andtheirrelationshipsinhumangliomas．2、ToconstructRNAilentivirusexpressivevectorsspecifictoHesl，Hes5geneandestablishHesl，Hes5knockdownglioma

6、celllines．3、ToobservetheeffectofHesl，Hes5genesilencingonproliferationofgliomascellsandfindoutthepossiblemechanismsofNotch—Hessignalpathwayinvolvedinproliferationofgliomas．Methods：1、ExpressionsoftheNotchl，HeslandHes5proteininhumanastrocytomatissuespecimensandnormalhumanbrainsamplesweredetectedbyim

7、munohistochemicalmethod．2、Severalpairsofdouble-strandoligosencodingshRNAofHeslandHes5weredesignedandsynthesized，thenclonedintopENTR／U6entryvectoruseGatewaytechnology．TransfecttheentryclonesintoU251cellstoperformtransie