神经干细胞的蛋白表达及神经胶质瘤分级和蛋白表达相关性分析

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1、博士学位论文中文摘要摘要第一章神经千细胞的分离、培养及蛋白表达第一节神经干细胞的分离、培养及鉴定研究背景神经干细胞(neuralstemcells，NSCs)是指中枢神经系统中具有自我更新能力并且能够分化成脑细胞(包括神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞)的多潜能细胞。目前已经相继从啮齿类动物和人的胚胎及成年脑组织中系统分离、纯化出神经干细胞。神经干细胞不仅能促进神经元的再生和脑组织的修复，而且通过基因修饰还可用于神经系统疾病的基因治疗，表达外源性的神经递质、神经营养因子及代谢性酶，为许多难以治疗的神经

2、系统疾病提供了新的治疗途径。虽然这类细胞终身存在，但由于绝对数量和局部微环境的限制，使损伤神经组织自我修复作用微乎其微。采用外源性的神经干细胞移植己被认为是治疗神经系统疾病最具前景的治疗方法之一。方法本研究采用无血清培养液，给予能刺激神经干细胞增殖的生长因子一bFGF和EGF，利用神经干细胞具有自我更新和增殖能力的特性，从胚胎大鼠的大脑皮层、室管膜下区和海马等部位分离培养神经干细胞。博士学位论文中文摘要硅电当日术成功从新生大鼠脑组织中分离、培养出神经干细胞，并能够诱导分化为神经元、星型胶质细胞和少突胶

3、质细胞。经3次、10次、20次传代后的细胞同原代细胞一样，分化形成的细胞中均可检测到三种不同类型的成熟神经细胞。结论-’●●，U神经干细胞是能自我更新并具多种潜能的母系神经细胞，它能分化成各种神经组织细胞表型，如神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。神经干细胞的成功分离和体外培养对通过细胞移植治疗中枢神经系统疾病的研究具有重要意义。关键词神经干细胞，增殖，分化博士学位论文中文摘要第二节PPARY、P21WAFl／CIPl及P16在神经干细胞的表达研究背景过氧化物酶增殖物激活受体(Peroxisomepr

4、oliferators-activatedreceptor，PPAR)是核激素受体超家族的成员，有3种亚型：PPARQ、PPARY和PPAR13／6。它们由不同的基因编码，却有相似的氨基酸序列，尤其是DNA结合结构域和配体结合结构域的氨基酸序列。PPARY是一类由配体激活的核转录因子，属II型核受体超家族成员。PPARl,及其相关通路在胰岛素的敏感性，组织的稳态平衡及细胞功能的调节中都发挥着重要作用。P21基因又称CIP1(cyclindependentkinaseinteractingprotein

5、I)，WAFl(wild-typep53-activatedfragment1)或SDIl(senescentcell．derivedinhmitor1、)基因，为P53的下游基因，是细胞周期重要调控因子一细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子(cyclindependentkinaseinhibitors，CKIs)中的一员。P21WAFl／CIPl基因是细胞周期的有效调控者，与细胞衰老也有关系，同时还是抑制肿瘤细胞生长的关键因子。P16基因是编码人类细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)抑制因子的基因，又称

6、多肿瘤抑制基因(MTSl)、CDKN2。正常情况下P16蛋白水平在G1晚期达高峰，这可能与Rb蛋白功能状态有关。P16蛋白调节细胞周期的可能途径是：在G1晚期，细胞周期蛋白D1水平升高，进而结合CDK4和／或CDK6并使其活化，促使Rb蛋白磷11I博士学位论文中文摘要酸化，转录活化因子E2F与Rb蛋白分离，刺激细胞增殖。同P2lW虾l妃IPl一样，P16也是一种CKI，负性调节细胞周期。方法采用细胞免疫荧光标记法、westernblot和RT-PCR分别检测PPARY、P21WAFl／CIPl和P16

7、蛋白或mRNA在神经干细胞不同阶段的表达水平。馇甲：口爿弋1．免疫荧光定位显示，PPAR?、P21WAFl／CIPl或P16蛋白被染成绿色，在神经干细胞上均可见。荧光主要位于细胞核内，细胞质中也有少许，说明它们均主要在细胞核内表达。2．Westernblot示，经PPARy、P21WAFl／CIPl或P16抗体分别孵育后出现的强阳性蛋白印迹条带也证实了PPAR?、P2lWAFl／CIPl或P16在神经干细胞上的表达。并且随诱导分化时间延长，PPAR?表达量逐渐降低，蛋白条带变浅；而P21WAFl／CI

8、Pl及P16表达量逐渐升高，蛋白条带加深。3。RT-PCR示，在未分化及已分化的神经干细胞中均检测到PPAR7、P21WAFl／CIPl及P16的cDNA。同westemblot结果的趋势一致，PPAR?从分化后第一天即开始显著减少；而P21WAFl／CIPl和P16mRNA在神经干细胞分化的过程中逐渐升高，在P21WAFl／CIPl尤其明显。TV结论随着神经干细胞的分化，PPARY的mRNA和蛋白表达水平逐渐下降，而P21WAFl／CIPl和P16则逐