应用蛋白芯片技术研究叶酸对体外缺氧胎鼠神经干细胞凋亡相关蛋白表达

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1、分类号：R151密级：内部2年学位类别：科学学位囤专业学位口0学校代码：10062学号：20082188学科门类：医学夭坪眚科鼻辱硕士学位论文MASTER’SDISSERTATIoN论文题目：应用蛋白芯片技术研究叶酸对体外缺氧胎鼠神经干细胞凋亡相关蛋白表达TITLEEffectsoffolicacidonapoptosis-relatedproteinsinhypoxiafetalratneuralstemcellsbyproteinchiptechnology一级学科：公共卫生与预防医学二级学科：营养与食品卫生学论文作者：张莹指导教师：常红

2、、黄国伟教授导师组成员：张绪梅副教授任大林副主任技师刘欢、王璇讲师天津医科大学研究生院二。一一年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：丝整日期：)．，，年苦月>日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内

3、容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以●供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。r——-1，、保密l讨，在二年解密后适用本授权书。本论文属于不保密口。(请在以上方框内打“√”)学位论文作者签名：导师签名：日期：z．It年‘月2日专互=日期：厶，，年‘月)日V天津医科大学硕士学位论文JIIIIIIIIIIIIIIIIIIIfY2397156中文摘要目的探讨应用表面增强激光解离飞行时间质谱技术(surface-enhancedlaserdesorption／ionizationtime

4、offlightmassspectrometry，SELDI—TOF—MS)测试不同剂量叶酸(folicacid，FA)作用下缺氧胎鼠神经干细胞(Neuralstemcells，NSCs)的蛋白质表达谱，从中筛选出差异表达蛋白，明确叶酸对其相关作用通路的保护机制。方法原代培养胎鼠神经干细胞，获得NSCs并分为5组：①正常对照组(Contr01)叶酸浓度为4肛g／ml；②缺氧模型组(Hypoxia)叶酸浓度为499／ml：⑨缺氧叶酸低剂量组(Hypoxia+Folate-L)叶酸浓度为8}．tg／ml④缺氧叶酸高剂量组(Hypoxia+Fola

5、te．H)叶酸浓度为4499／ml；⑤缺氧叶酸缺乏组(Hypoxia+Folate．D)叶酸剂量为0．65}tg／ml；于增殖第3d将除正常对照组外的其他4组细胞进行缺氧培养，8h后取出，继续培养至第7d收集增殖期细胞；细胞形态学观察：用台盼蓝染色计数缺氧损伤后的各组细胞密度；MTT法检测叶酸对细胞增殖状态的影响；采用弱阳离子交换芯片(WCX．2)蛋白芯片检测不同叶酸剂量下胎鼠NSCs蛋白表达差异；结果采用BiomarkerWizard软件进行分析，通过查询蛋白库，对特定分子质量所对应的标记蛋白进行初步确定；采用流式细胞术检测各组的凋亡率及细

6、胞周期；采用Westernblot方法检测各组NSCsMAPK信号通路相关蛋白(pERKl／2、pJNKl／2、P38)表达。夸士申当日木经37。C，5％C02、1％02、94％N2条件缺氧8h后，NSCs形态及计数上都显示出损伤迹象，成功建立体外胎鼠NSCs缺氧损伤模型。MTT结果显示：每组隔天之间MTT值均有差别(P<0．05)。除24h时间点外，经SNK—q检验得出叶酸不同剂量组与对照组相比均有差别(氏0．05)，除Hypoxia+Folate．D组随时间MTTOD值呈下降趋势以外，其余四组随时间MTTOD值均呈上升趋势，之后有所下降。

7、台盼蓝染色计数活细胞密度结果显示，Hypoxia组与其余四组差异有统计学意义(P<0．05)，Hypoxia+Folate—H组最高、Hypoxia+Folate-D组最低，天津医科大学硕士学位论文差异均具有统计学意义(P

8、酸补充可促进NSCs增殖：每组芯片上均捕获到81种蛋白质点，筛选出不同叶酸剂量组与Control组之间的差异蛋白共34种，其中有5个蛋白存在显著性差异(尸<0．05