jnk信号通路介导bex2对神经胶质瘤细胞增殖和凋亡作用地研究

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1、‘lr～徐州医学院硕士学位论丈缩略词ARbpBSA缩略词表Abbreviation英文全称ApoptoticRateBasepair凋亡率碱堆对中文全称Bovineserumalbumin牛血清白蛋白CaspaseCysternylaspartate．specificprotease天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶CCK-8CellCountingKit一8DABDEPCddH20DiaminobenzidineDiethypyrocarbonateDoubledistilledWatel"细胞计数试剂盒．8二：氨基联苯胺焦碳：乙酯双蒸水DMEMDulbecco’sMo

2、difiedEagleMediaDulbecco改良Eagle培养基DMSODimethylsulfoxide二甲基亚砜EBECLEGFPFBSHRPICClHCJNKKDNF．KBEthidiumbromide溴化乙锭Electrochemiluminescence电化学发光Enhancegreenfluoresentprotein增强型绿色荧光蛋白Fetalbovineserum胎牛血清Horseradishperoxidase辣根过氧化物酶Immunocytochemistry免疫细胞化学lmmunohistochemistry免疫组织化学c-JunN．ter

3、minalkinasec-Jun氨基末端激酶KilodaltonNuclearfactor1(B千道尔顿核因子rB．L■I徐州医学阮硕士学位论丈ODPAGEPBSPCRPVDFrpml玎SDSSFMsiRNATBSTTrisWBOpticaldensity吸光度Polyacrylamidegelelectrophoresis、聚丙烯酰胺凝胶电泳Phosphatebuffersolution磷酸盐缓冲液PolymerasechainreactiPolyvinylidenefluoride∞l》RevolutionsperminuteReversetranscripti

4、onSodiumdodecylsulfateSmallinterferingRNA聚合酶链反应聚偏二氟乙烯‘姨I食铵反转录十二烷基硫酸钠无血清培养基小干扰RNA"Iris沈脱缓冲液"Irishydroxymethylaminomethanei羟甲基氨基甲烷Westernblot；免疫印迹2徐州医学院硕士学位论丈JNK信号通路介导Bex2对神经胶质瘤细胞增殖和凋亡的作用研究中文摘要目的1．检测人脑胶质瘤手术标本中Bex2的衷达水平，分析其与胶质瘤发生的相关性；2．研究Bex2对U251及U87神经胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响，并探讨其作用机制，为胶质瘤的基囚治疗提供理论

5、和实验依据。方法1．收集临床神经胶质瘤手术标本，通过RT-PCR及Westernblot(WB)分别检测Bex2核酸及蛋白的表达水平，分析Bex2与人脑胶质瘤的相关性；2．构建pEGFP．N1．Bex2真核表达载体，用WB及免疫细胞化学(ICC)检测其在U25l神经胶质瘤细胞中的过表达效果；CCK．8检测过表达Bex2对细胞增殖的影响；3．设计针对人Bex2基因特异性的三条siRNAoligo，并通过RT-PCR及WB检测其在U251和U87神经胶质瘤细胞中的干扰效果；CCK．8检测下调Bex2表达后12h，24h，48h，72h，96h各时间点U25l及U87神经

6、胶质瘤细胞增飧变化；4．AnnexinV／PI染色后用流式细胞术及Hoechst33258染色检测下调Bex2表达后U25l、U87神经胶质瘤细胞凋亡变化：WB检测下调Bex2表达后cleavedcaspase．3、cleavedcaspase一9的水平；5．在干扰Bex2同时用或不用JNK特异性抑制剂SP600125处理细胞，WB检测p-JNK、p-c．Jun的水平；流式细胞术分析U251神经胶质瘤细胞的凋亡情况。结果1．在人脑胶质瘤手术标本中Bex2表达明显高于非肿瘤脑组织，差异有统计学意义(P

7、表达Bex2促进细胞增殖；3．三条Bex2特异性siRNAoligo干扰效率均达70％～80％；CCK8检测细胞增殖结果显示：下调Bex2表达后48h，72h，96h各时问点细胞增殖能力较阴性对照组明显下降；4．流式细胞术及Hoechst33258染色结果显示下调3徐州医学院硕士学位论丈Bex2表达后48h细胞凋亡率明题高F阴性对照组(尸<0．05)；下调Bex2表达后48hcleavedcaspase一3、cleavedcaspase一9水平升高。5．下调Bex2表达后48hp-JNK、P．C．Jun升高，差异有统计学意义(P<0．05)；JNK特异性抑制剂S