补肾药对bmscs成骨分化及ostreix oc甲基化的影响

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1、陕西中医学院2014届硕士学位论文陕西中医学院学位论文独创性声明及使用授权声明学位论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，无抄袭及编造行为。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果并由本人所承担的法律责任。学位论文作者签名』药缉日期：加仲年岁月28日关于学位论文使用授权的声明陕西中医学院有权保

2、留使用本人学位论文，同意学院按规定向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权陕西中医学院可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。可以公布(包括刊登)论文的全部或部分内容。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名论文导师签名2期：力f牛年多月29日期：≯／牛年多月29日中文摘要m㈣0啪洲0Illllm《㈣lllllmlY2617544目的：观察补肾药对大鼠骨髓间充质干细胞中成骨相关转录因子抗体(0st

3、erix)、骨钙素(0C)的影响，从中研究补肾药促进BMSCs向成骨分化的分子遗传学机制，进而为从表观遗传学角度研究中医“肾主骨”理论探索一个新的思路。方法：选择健康成年清洁级4周龄SD(Sprague—Dawley)大鼠，先用20只大鼠雌雄各半，平均分为2组，左归丸组及右归丸组，分别灌胃给药，左归丸组灌胃左归丸，右归丸组灌胃右归丸，早8点晚4点各灌胃1次，连续灌胃3天，然后采血、离心、抽滤含药血清、一20℃冻存备用。未给予中药灌胃的大鼠无菌条件下，提取骨髓间充质干细胞，培养箱培养，每2天换培养液1

4、次，培养7—9天左右当细胞达到80％融合后，进行细胞传代，传代细胞贴壁后进行实验并分组干预。实验分组：1、正常对照组：用含10％生理盐水的DMEM培养；2、成骨诱导组：用成骨诱导条件培养基培养；3、左归丸组：10％左归丸含药血清加成骨诱导条件培养基；4、右归丸组：10％右归丸含药血清加成骨诱导条件培养基；5、补骨脂素组：补骨脂素加成骨诱导条件培养基；6、齐墩果酸组：齐墩果酸加成骨诱导条件培养基；分别干预3天后用I{TQ—PCR及甲基化特异性PCR检测法进行Osterix及0C基因表达和甲基化状态检测

5、。结果：l、实验各组分别培养干预3天后进行RealtimeR，f—1)CR检测0sterix及0C的表达，0ste“x的表达右归丸组最高，左归丸组次之，左归丸及右归丸组的表达明显高于其它各组，组问比较差异明显(P<0．05)。0C的表达补骨，月旨素组及齐墩果酸组较高，左归丸及右归丸组次之，但明显高于正常对照组及成骨诱导组，组问比较差异明显(P<0．05)。2、实验各组分别培养干预3天后进行甲基化特异性PCR测序法检测0sterix和0C基因启动子区域甲基化状态，0sterix和0C甲基化下调，左归丸

6、组、右归丸组优于其它各组，组间比较差异明显(P<0．05)。结论：补肾药能促进成骨相关转录因子抗体(0sterix)和骨钙素(0C)基因的高表达并且甲基化下调，进而促进骨髓问充质干细胞向成骨细胞分化，对中医“肾主骨’’的理论提供了有力依据。关键词：补肾药：骨髓间充质干细胞：左归丸：右归丸：0sterix：0C：EffectsofTonifyingShenrecipesontheosteogenicdifferentiationofBMSCsandthemethyIationof0sterixand0

7、CAbstractObjectiVe：ToobserVetheef．fectsofTonifyingShenrecipesonbone-relatedtranscriptionfactorantibody(0sterix)andosteocalcin(0C)intoratsbonemarrowmesenchymalstemcells(BMSCs)，weresearchedthemoleculargeneticsmechanismofTonifyingShenrecipespromotingosteo

8、genicdif-ferentiationofBMSCs．’rherebyf．romtheperspectiVeofepigeneticsweexploredanewwayofthinkingtostudythetraditionalChinesemedicaltheoIyofthekidneybeinginchargeofbone．Methods：Firstwithhealthyadultclean4一week—oldSD(Sprague——Dawley)rats，