noggin及bmp2基因对adscs和bmscs成骨分化能力的影响及比较研究

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1、Noggin及BMP2基因对ADSCs和BMSCs成骨分化能力的影响及比较研究ComparisonoftheOsteogenesisofBoneMarrow-andAdiposeTissue-DerivedMesenchymalStemCellsunderNogginSuppression作者姓名：唐宇欣专业名称：口腔医学指导教师：孙宏晨教授林崇韬教授学位类别：口腔医学硕士答辩日期：2015年5月25日摘要Noggin及BMP2基因对ADSCs和BMSCs成骨分化能力的影响及比较研究目的：本实验尝试在体外环境下下调细胞中Noggin基因和增加B

2、MP2基因，观察对脂肪干细胞(ADSCs)和骨髓干细胞(BMSCs)成骨分化能力的影响及两种干细胞成骨分化能力的比较。方法：使用脂质体将NogginshRNA和BMP2基因共同转染取自同一只SD大鼠的BMSCs和ADSCs中，并进行成骨诱导。分别在3、7、14天三个时间点，采用Realtime-PCR技术检测成骨相关基因的表达，并通过茜素红染色法检测其成骨分化能力。结果：1.ADSCs和BMSCs细胞形态学观察显示：成功从同一只SD大鼠中取得ADSCs和BMSCs，并观察其成骨、成脂诱导后茜素红染色和油红O染色。2.Realtime-PCR结果

3、显示：3、7、14天ADSCs及BMSCsBMP2基因的表达趋势相同，BMP2组BMP2基因的表达明显高于EGFP组（对照组）（P<0.01），而BMP2+NogginshRNA组BMP2基因的表达明显高于BMP2组（P<0.01）。3.Realtime-PCR结果显示：转染3、7、14天后ADSCs实验组（BMP2、BMP2+NogginshRNA）Runx2、Col1、ALP、Sp7成骨基因的表达与对照组（EGFP）相比均显著升高（P<0.01）。而BMP2+NogginshRNA组Runx2、Col1、ALP、Sp7成骨基因的表达与BMP

4、2组相比均显著升高（P<0.01）。同样地，转染3、7、14天后BMSCs实验组（BMP2、BMP2+NogginshRNA）Runx2、Col1、ALP、Sp7成骨基因的表达与对照组（EGFP）相比显著升高（P<0.05）。而BMP2+NogginshRNA组Runx2、Col1、ALP、Sp7成骨基因的表达与BMP2组相比显著升高（P<0.05）。4.茜素红染色结果显示：EGFP组、BMP2组、BMP2+NogginshRNA组钙结节量明显呈现递增趋势。定量分析结果显示呈递增趋势，有统计学意义（P<0.01）。BMSCs形成的钙结节明显大于

5、ADSCs，有统计学意义（P<0.01）。I5.Realtime-PCR结果显示：BMP2基因和Noggin基因沉默共同修饰后BMSCs成骨基因Runx2、Col1、ALP、Sp7的表达与同等条件下的ADSCs相比均显著上调（P<0.01）。BMP2基因和Noggin基因沉默共同修饰后的ADSCs3、7、14天BMP2基因的表达与对照组（EGFP组）的BMSCs相比均显著上调（P<0.01），而成骨基因Runx2、Col1、ALP、Sp7的表达却显著下调（P<0.01）。结论:1.BMP2基因及NogginshRNA共同作用的干细胞BMP2的表

6、达及成骨分化能力优于BMP2单基因作用的干细胞；2.BMP2基因及NogginshRNA修饰下BMSCs的成骨能力优于ADSCs；3.不经基因修饰的BMSCs成骨能力优于BMP2基因及NogginshRNA修饰的ADSCs。关键词：脂肪干细胞,骨髓间充质干细胞,BMP2,Noggin,成骨分化IIAbstractComparisonoftheOsteogenesisofBoneMarrow-andAdiposeTissue-DerivedMesenchymalStemCellsunderNogginSuppressionObjectives:T

7、hisstudyattemptstoobservetheeffectandcompareofosteogenesisabilitybetweenadiposemesenchymalstemcells(ADSCs,AdiposeDerivedStemCells)andbonemarrowmesenchymalstemcells(BMSCs,BoneMesenchymalStemCells)withknockdoweNogginandincreasingBMP2invitro.Methods:BMSCsandADSCsfromthesameSDra

8、taretransfectedbyBMP2andnogginshRNAwithlipidosomeinvitrosothatosteogenesisc