耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的流行病学及耐药机制研究

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1、万方数据中图分类号UDCR446．5610硕士学位论文学校代码10533耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的流行病学及耐药机制研究Studyontheepidemiologyandresistantmechanismofcarbapenem—resistantAcinetobacterBaumannii作者姓名：豆清娅学科专业：临床检验诊断学研究方向：细菌耐药检测和耐药机制学院(系、所)：湘雅医院指导教师：邹明祥副教授论文答辩日期塑＆：!：盈答辩委员会主席中南大学二零一四年五月万方数据学位论文原创性声明㈣本人郑重声明

2、，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：互l盍垃日期：j监年j旱日学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交

3、学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：互瓷娅日期：韭年』月丑日靳签名毕矽EtN：坐年—幼兰珥万方数据本课题由以下基金资助1．中南大学研究生自主探索创新基金课题：插入序列ISAbal与鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类耐药关系的研究(2013zzts317)。2．湖南省自然科学基金课题：产NDM．1革兰阴性杆菌中国分离株的流行病学及遗传背景研究(14JJ

4、7003)。3．湖南省发改委科研课题：湖南地区临床主要泛耐药革兰阴性杆菌的流行病学及耐药机制研究(湘发改投资[2012]305号)。万方数据耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的流行病学及耐药机制研究摘要目的：(1)了解碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌(CRAB)的临床分布、耐药现状及分子流行病学特征，为临床合理使用抗菌药物，预防和控制耐药菌株的流行提供实验依据。(2)探讨插入序Y'JISAbal、碳青霉烯酶及外排泵AdeABC系统与鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类药物耐药的关系。方法：(1)收集湖南地区2012年4月"-一2013

5、年3月10家综合医院临床分离的270株碳青霉烯类药物耐药的鲍曼不动杆菌；K．B法检测菌株对18种抗菌药物的敏感性；药敏结果以软件WHONET5．6进行分析。(2)采用重复序列引物聚合酶链反应(REP．PCR)分析来自不同医院的9l株CRAB同源性。(3)改良Hodge试验检测碳青霉烯酶；双纸片协同试验检测金属p．内酰胺酶；多重PCR检测OXA．51、OXA．23、OXA．58、OXA．24等碳青霉烯酶基因及IMP、VIM和SIM等金属B一内酰胺酶基因；PCR检测插入序列ISAbal—OXA．23、ISAba

6、l．OXA．51及转座子Tn2006、Tn2008基因，并对扩增产物进行测序及BLAST分析。(4)采用美罗培南多步法诱导性耐药试验体外诱导敏感鲍曼不动杆菌以获得对碳青霉烯类药物耐药的菌株；E—test法定量检测诱导前后菌株的敏感性；CCCP抑制试验筛查外排泵；PCR及测序分析诱导前后AdeABC系统的调控基因adeS、adeR及主要碳青霉烯酶基因的变化；荧光定量PCR检测诱导前后adeA、adeB、adeR和adeS基因mRNA的表达量。结果：(1)270株CRAB主要分离自呼吸道标本(78．90％)，其

7、次为创面分泌物(10．74％)；科室分布以重症监护室(ICU)为主(50．0％)，其次为神经外科(7．78％)、神经内科(7．41％)和烧伤科(7．41％)。在检测的18种药物中，14种药物耐药率超过90．0％。哌拉西林耐药率最高(100．0％)，头孢哌酮／舒巴坦的耐药率最低(48．9％)。(2)91株CRAB共分为A、B、C、D、E、F、G7个型别，III万方数据菌株数分别为79株、4株、2株、2株、1株、2株、1株；A型又分为A1和A2两个亚型，分别为46株和33株；所有被检测医院均出现A型菌株。(3)

8、270株CRAB中，改良Hodge试验阳性156株，阳性率57．8％；金属酶表型检测均为阴性；所有菌株均检测到0xA一51基因，267株菌检测到OXA一23基因，l株检测到OXA．58基因，未检测到O)认．24、IMP、VIM、SIM基因。41株对碳青霉烯类药物敏感的鲍曼不动杆菌OXA一51基因均阳性，OXA．23、OXA-58、OXA一24均阴性。267株菌的OXA．23基因上游均检测到插入序列ISAbal，所