冠突散囊菌产色素类物质的初步研究

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1、论文题目：瞎压料技大学冠突散囊菌产色素类物质的初步研究申请学位学科：工学所学学科专业：生物化工培养单位：生命科学与工程学院硕士生：韩蓉导师：吕嘉枥教授2014年5月PRELIMINARYSTUDYoNTHEPIGMENTSOFEURoTIUMCRISTATUMAThesis(orDissertation)SubmittedtoShaanxiUniversityofScienceandTechnologyinPartialFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterof．E．．．．n．．．g．．．i．．n．．．

2、e．．．e．．．r．．i．．n．．．．g．．ThesisSul：ProfessorJialiLVeslsbuoervlsor：rotessorJla-liMay,2014冠突散囊菌产色素类物质的初步研究摘要茯砖茶的茶汤呈现透亮的橙红色，具有降血脂血糖、减肥助消化及抗氧化等保健功效。冠突散囊菌是茯砖茶发花过程中形成的优势菌株，其代谢产物种类繁多，有色素类、胞外多糖类、酶类、氨基酸类等，前期实验研究发现，色素类物质具有一定的生理活性，因此具有很高的研究价值。本研究以陕西茯砖茶中提取的冠突散囊菌为菌种，采用麸皮对其进行固体培养，通过超声辅助提取等方法对冠突散囊菌色

3、素进行提取并对提取条件进行优化，通过TLC、HPLC等方法对提取出的色素进行分离纯化，利用紫外、红外光谱等方法对其结构进行初步探究，从而推测出可能的色素类型，为药品和保健食品的开发奠定基础。本研究的内容和结果如下：1．在冠突散囊菌固体培养工艺条件优化的基础上，考察了菌体生长期间代谢产物中黄色素产量的变化情况，结果表明：黄色素代谢产物的变化趋势为先升高，后降低，固体培养至第五天时，冠突散囊菌代谢的黄色素产量最大。2．以石油醚为最佳提取溶剂，优化了超声辅助提取法和有机溶剂浸提法的工艺条件，结果如下，超声辅助提取法的最佳提取工艺为：料液比1：20，温度50℃，时间

4、20min。‘最高得率可达1．34％左右。有机溶剂浸提法的最佳提取工艺为：料液比1：30，温度60℃，时间1h。最高得率可达O．83％左右。结果表明：超声辅助提取法所用时间短，提取效率高，减少了一些非目标物质的溶出，极大降低了杂质的干扰，提取效果明显优于有机溶剂浸提法。3．利用薄层色谱、高效液相色谱等方法对冠突散囊菌色素提取液进行分离纯化。(1)选择了16种不同极性的展开剂对冠突散囊菌色素提取浓缩液中的成分进行初步分离，结果表明：展开剂石油醚：乙酸乙酯=1：1(v～)能分离出两个主要斑点，分别是Rf值为O．882的黄色斑点和Rf值为O．776的红色斑点。分离

5、效果的重现性良好，且两个斑点的Rf值相差比较大，有利于黄色斑点的收集，将收集到的黄色斑点记为黄色素。(2)将上述黄色斑点即黄色素收集后，利用展开剂石油醚：丙酮=9：1(v／v)对其进行二次分离，结果表明：展开剂石油醚：丙酮=9：1(v／v)能将黄色素再次分开为三个主要斑点，其Rf值分别为O．513、0．462、0．423，分离效果的重现性良好，且三个斑点的R；值相差比较大，有利于三种组分的分开收集，收集到的三种组分分别记为：黄色素组分I、黄色素组分II、黄色素组分III。(3)采用高效液相色谱法对黄色素组分I、黄色素组分II、黄色素组分III进行进一步的分离

6、，结果表明：黄色素组分I在流动相甲醇：水=90：lO(v／v)的洗脱下，分离图谱上出现了1个主要物质峰，其保留时间为15．65lmin；黄色素组分II在流动相甲醇：水=95：5(v／v)的洗脱下，分离图谱上出现了2个主要物质峰，其保留时间分别为6．69min、16．296min；黄色素组分III在流动相甲醇：水=95：5(v／v)的洗脱下，分离图谱上同样出现了2个主要物质峰，其保留时间分别为6．605min、15．038min。4．利用薄层色谱、紫外一可见光谱、红外光谱等方法对黄色素与番茄红素、p．胡萝卜素、苯甲酸三种对照品进行对比性探究，推测黄色素的结构类

7、型。(1)利用薄层色谱法，将黄色素与番茄红素、p．胡萝卜素对照品进行对比性验证，展开剂为石油醚：丙酮=3：1，结果表明：番茄红素的R值为0．923，D一胡萝卜素对照品的R值为0．962，黄色素样品斑点的R值集中在0．610左右，由此可知，三者的R值有明显的差别，因此推测黄色素与番茄红素、B一胡萝卜素不是同一类物质。(2)利用紫外．可见光谱法在300—600nm范围内进行波长扫描，对黄色素与番茄红素、p一胡萝卜素、苯甲酸三种对照品进行对比性验证，结果表明：番茄红素有三个特征吸收峰，分别为444nm、470nm、502nm；p．胡萝卜素有两个特征吸收峰，分别为4

8、50nm、478nm；苯甲酸有两个特征吸收峰，分别为