不同方法将骨髓间充质干细胞移植到大鼠视网膜下的比较

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1、南方医科大学2011级硕士学位论文不同方法将骨髓间充质干细胞移植到大鼠视网膜下的比较Comparisonofdifferentmethodsoftransplantingbonemarrowmesenchymalstemcellsintothesubretinalofrat课题来源：湖北省卫生厅青年科技人才基金(编号：QJX2010．32)学位申请人邓君导师姓名陈晓专业名称眼科学培养类型专业型培养层次硕士研究生所在学院研究生学院2014年03月18日广州不同方法将骨髓间充质干细胞移植到大鼠视网膜下的比较硕士研究生：邓君指导老师：陈晓摘要研究背景近

2、年来，视网膜变性疾病，包括年龄相关性黄斑变性，视网膜色素变性等，发病率逐渐升高，是主要的致盲性疾病。这些疾病都是以进行性色素上皮细胞(retinalpigmentepitheium，RPE)、光感受器细胞的功能丧失，凋亡或坏死为特点，造成视力不可逆的损害。正常的RPE是具有极性的单层细胞，位于视网膜的最外层。它是代谢高度活跃的细胞层，主要支持感光细胞层。主要功能包括转运营养物质，视黄醇回收利用，产生色素以及吞噬视锥、视杆细胞外节。RPE在其细胞顶面分泌色素上皮衍生生长因子(pigmentepitheliumderivedgrowthfactor，

3、PEDF)，基底侧分泌血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)。每个细胞与Bruch膜紧密相连，相邻细胞间的紧密联系构成了血视网膜屏障。在湿性AMD中，由于RPE的功能失调，屏障功能的损坏，异常的新生血管由脉络膜发出，穿过玻璃膜和视网膜色素上皮到达视网膜下，形成脉络膜新生血管，继而引发出血及瘢痕的形成，破坏了正常的视网膜组织，引起视力的丢失。在干性AMD中，RPE的功能丧失、凋亡最终导致了黄斑部位光感受器的丧失，从而导致视力的缺损。虽然营养及抗氧化的药物治疗，或在湿性AMD中，玻璃体内注射抗VE

4、GF因子能减缓疾病的进展，但没能替换掉RPE或感光细胞从而逆转AMD病程。鉴于病变的RPE是AMD主要的病变部位，通过手术的方式替换掉黄斑部的病变的RPE应该有效。目前主要有黄斑转位手术和RPE自体移植术，前者是将黄斑摘要区神经视网膜层转移到周边健康的RPE区域，后者则是将外周相对健康的RPE-脉络膜植片移植至黄斑区，这两种手术方式已在部分病例中被采用，在长期的随访中均被证实可维持或提高患者的视力。然而上述两种手术存在创伤大、操作复杂，并发症多的缺点，难于在临床上推广使用，另外，这些手术方法仅能对RPE的损害有效，对于黄斑光感受器严重受损的病例则

5、难于发挥作用。因此寻找一种操作简单，便于推广、创伤伤小的细胞替代方法越来越受到关注。干细胞是一群具有自我更新及多向潜能的细胞群。利用干细胞的可塑性，定向分化为目的细胞进行细胞移植或利用干细胞的分泌细胞因子修复受损的视网膜及RPE，已经成为视网膜变性疾病治疗的研究热点。干细胞研究主要分为两大类，胚胎干细胞和成体干细胞。胚胎干细胞分化潜能强，可以向内，中，外三个胚层的组织分化。但是免疫排斥的问题及伦理道德的问题限制其广泛的应用。成体干细胞，也具有多向分化的潜能，取材容易，无伦理道德问题，成为近年来研究的热点。应用于视网膜疾病治疗实验研究的成体干细胞主

6、要有：视网膜干细胞、骨髓间充质干细胞(bonemarrowmesenchymalstemcells，BMSCs)、脑源性干细胞等。相比于其他干细胞，BMSCs具有以下优点：1)BMSCs也具有向三个胚层的组织细胞分化的能力，如骨细胞、软骨细胞、心肌细胞、神经细胞等；2)取材容易，易于扩增，无伦理道德的问题；3)具有强大的旁分泌作用，分泌神经营养因子和生长因子促进损伤组织的修复；4)具有免疫调节及抑制炎症因子释放的作用，有利于同种异体的移植，减少免疫排斥药物的使用；5)主动向损伤组织区域迁移的作用；6)移植后无肿瘤形成的倾向。这些优点使得BMSCs

7、移植视网膜变性疾病治疗研究中备受关注。已经有体外实验中表明，BMSCs在活化素A、牛磺酸和表皮生长因子的诱导作用下能表达感光细胞特异性标记物视紫质、视蛋白等。将BMSCs视网膜色素上皮细胞共培养后，可观察至UBMSCs向RPE分化，呈现出RPE的形态，细胞内具有颗粒，表达RPE的标志物一细胞角蛋白表达。这些研究均提示，BMSCs在微环境的作硕士学位论文用下有向视网膜细胞分化的潜能。如何将干细胞移植到视网膜下，并使其在视网膜下能维持更多地活细胞数量，并能在局部微环境作用下向REP或光感受器细胞分化，是细胞移植治疗中的一个关键问题。目前文献上报道细胞

8、移植途径主要有眼局部注射和全身静脉注射两大类。前者又包括视网膜下注射和玻璃体腔注射。这几种移植方式各有优缺点．(1)视网膜下注射：直接把