wnt信号通路在右半肠锯齿状息肉中的作用及其调控机制

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1、目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．7刖舀⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．／第一章Wnt信号通路主要分子在右半结肠锯齿状息肉中的表达1．材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一1l2．结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯153．讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24第二章右半结肠锯齿状息肉中APC、p．catenin基因突变检测1．材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一292．结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯343．讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36第三章右半结肠锯齿状息肉中APC基因启动子甲基化检测1．材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．392．结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯463．讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．49全文结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯51参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯52附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯56致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯57攻读学位期间成果(论文发表)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯58Wnt信号通路在右半结肠锯齿状息肉中的作用及其调控机制摘要目的：(1)研究Wnt信号通路在右半结肠锯齿息肉发病机制中的可能作用；(2)探索右半结肠锯齿状息肉中Wnt信号通路的激活及调控机制。方法：收集2011年1月至2012年11月泸州医学院附属医院消化内镜中心行息肉切除术或内镜活检的216例新鲜息肉组织，收集10例正常的结肠黏膜组织作为

4、对照。HE染色后将上述组织分为右半结肠增生性息肉(right-sidedhyperplasticpolyp，RHP)、无蒂锯齿状腺瘤(sessileserratedadenoma，SSA)、右半结肠传统腺瘤(ri曲t．sidedtraditionaladenoma，RTA)、右半结肠癌(ri曲t．sidedcolorectalcancer，RCRC)、左半结肠增生性息肉(1emsidedhype叩lasticp01yp，LHP)左半结肠传统腺瘤(1eR．sidedtraditionaladenoma，uA)、左半结肠癌(1eR．side

5、dcolorectalcancer，LCRC)和正常结肠黏膜组织(nonnalc010nictissue，NC)八组。其中右半结肠包括了升结肠、盲肠及横结肠，左半结肠则包括降结肠、乙状结肠和直肠。(1)用免疫组化(SP法)和免疫荧光(间接法)，检测Wnt信号通路中的B．catenin、APC和c．myc在不同结肠组织中的表达情况。(2)各组织提取DNA，PcR扩增B．catenin第3外显子和APC第15外显子突变多发区的基因片段，将扩增的的片段直接测序，检测突变情况。(3)将各组织的DNA进行亚硫酸氢盐修饰，根据针对APC的启动子区设

6、计的引物(包括甲基化和非甲基化引物)进行甲基化特异性PCR(Methylation．speci6cPCRMSP)，PCR产物行凝胶电泳，判断各标本的甲基化情况。在右半结肠的HP和SSA中各选5例进行DNA亚硫酸氢盐修饰后测序分析(bisul6te．sequencinganalysisBsP)。PCR扩增出APC启动子片段，纯化回收目的片段后连接至pGM．T载体上，转化至感受态细胞内，培养后挑菌摇菌，提取质粒，直接测序，对比原序列分析APC启动子各CpG位点的甲基化情况。结果：(1)APC、p—catenin和c．myc蛋白的表达情况：p

7、—catenin细胞核染率在砒口组为17．9％，在SSA组为28．6％，高于LHP组(3．3％，P<0．05)。p—catenin细胞质染率在褂皿组为21．4％，在SSA组为33．3％，高于L邯组(13．3％，P<0．05)。APC表达量在R邯(72．2±17．0)、SSA(68．4±13．1)和L唧(53．7±26．5)三组高于TA(左：18．7±23．8；右：21．8±22．5)和CRC(左：31．4±21．5；右：34．4±19．7)组(P<0．05)。c—myc评分在脚(28．9±21．1)、SSA(35．7±17．5)和L呷(

8、39．O±16．3)三组之间无统计学差异性(JP>0．05)。而TA(左：76．9±16．0；右：76．9±17．5)和CRC(左：78．0±16．9：右：80．3±16．4)的c—myc的表达量高于Ⅺ口(