抗α1-肾上腺素能受体短肽抗体功能效应的研究

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1、华中科技大学博士学位论文抗α1-肾上腺素能受体短肽抗体功能效应的研究姓名：陈芬申请学位级别：博士专业：心血管内科指导教师：廖玉华2011-05-19华中科技大学博士学位论文抗α1-肾上腺素能受体短肽抗体功能效应的研究博士研究生：陈芬研究生导师：廖玉华华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管内科中文摘要第一部分抗α1A-肾上腺素能受体短肽抗体的功能研究目的：α1A-肾上腺素能受体是对血压维持和调节起着主导作用的α1-肾上腺素能受体亚型，可能是降压靶点。然而，针对此亚型高度选择性的拮抗剂至今还缺乏。我们旨在分析抗α1A

2、-肾上腺素能受体短肽的特异性抗体的功能，为高血压治疗提供新策略。方法和结果：我们筛选出α1A-肾上腺素能受体胞外环7-8个氨基酸短肽CP-7（位于胞外第二环肽）以及CPE-8（位于胞外第三环）。上述短肽与KLH偶联后免疫新西兰大白兔以及自发性高血压大鼠。前者血清经过50%饱和硫酸铵沉淀以及抗原肽段亲和纯化浓缩后得到特异性抗肽抗体，分别命名为Anti-CP-7以及Anti-CPE-8。蛋白免疫印迹以及细胞免疫荧光证实此两个抗体均能与α1A-肾上腺素能受体特异性结合，与α1B-以及α1D-肾上腺素能受体不存在交叉反应性

3、。体外功能分析证实仅有Anti-CP-7抗体可以显著性抑制苯肾上腺素刺激α1A-肾上腺素能受体引起的胞内钙升高，蛋白激酶C活化，细胞外信号蛋白激酶磷酸化，以及抑制基础和苯肾上腺素刺激状态下的心肌细胞搏动。与单独KLH免疫组相比，CP-7-KLH免疫组在免疫过程的某个阶段可以显著抑制自发性高血压大鼠血压升高，并与Anti-CP-7抗体滴度具有相关性。上述体内外效应在CPE-8表位免疫组中均不显著。2华中科技大学博士学位论文结论：我们研究证实Anti-CP-7能在体内外抑制α1A-肾上腺素能受体活性。我们的实验方法可能

4、成为缺乏特异性拮抗剂的α1A-肾上腺素能受体或者其他G蛋白偶联受体的新策略。CP-7表位可能是治疗高血压治疗的新靶点。关键词：α1A-肾上腺素能受体；抗体；高血压3华中科技大学博士学位论文第二部分抗α1D-肾上腺素能受体短肽抗体的功能研究目的：α1D-肾上腺素能受体是α1-肾上腺素能受体一种亚型，研究证实其参与维持和调节全身血压，活性增高可以导致高血压的发生和发展，可能是高血压治疗新靶点。然而其特异性拮抗剂目前还缺乏。我们旨在功能分析抗大鼠α1D-肾上腺素能受体胞外第二环短肽的特异性抗肽抗体，提供高血压治疗新策略。

5、方法和结果：大鼠α1D-肾上腺素能受体胞外第二环短肽表位（CF-8）与KLH偶联免疫新西兰大白兔以及自发性高血压大鼠。兔血清经过50%饱和硫酸铵沉淀以及抗原亲和纯化纯化出特异性抗肽抗体（Anti-CF-8），蛋白免疫印迹以及细胞免疫荧光证实Anti-CF-8可以特异性结合大鼠主动脉血管环以及主动脉血管平滑肌细胞上α1D-肾上腺素能受体；体外功能研究证实Anti-CF-8可以抑制苯肾上腺素刺激α1D-肾上腺素能受体引起的蛋白激酶C（PKC）移位，细胞外信号蛋白激酶(ERK)磷酸化，以及细胞质钙离子浓度的瞬时升高；可以

6、抑制苯肾上腺素刺激后主动脉血管环张力增高。自发性高血压大鼠动物模型被用来进一步评价Anti-CF-8在体效应，与单独KLH免疫组相比，CF-8-KLH免疫组整个免疫过程并没有显示出显著降压效果，其免疫后Anti-CF-8抗体滴度最高达到1:3200。结论：我们成功制备了一个可以体外特异性抑制α1D-肾上腺素能受体的抗体Anti-CF-8.然而其在体降压效应不显著，需要进一步提升抗体滴度来评估其在体效应。关键词：α1D-肾上腺素能受体；抗体；高血压；4华中科技大学博士学位论文FunctionalAnalysisofA

7、ntibodiesagainstShortPeptidesofα1-AdrenergicReceptorsPh.D.Candidate:ChenFenSupervisor:LiaoYuhuaInstituteCardiovascularDiseaseUnionHospitolHuazhongUniversityofScienceandTechnologyAbstractPartⅠFunctionalAnalysisofAntibodiesagainstShortPeptidesofα1A-AdrenergicRec

8、eptorAims：α1A-adrenergicreceptor(α1A-AR)isthecrucialsubtypeofα1-adrenergicreceptors(α1-ARs)inmaintenanceandregulationofbloodpressure.α1A-ARmaybethetargetofloweringhighbloodpressure