rbm5基因过表达抑制a549细胞增殖及其对dhx15表达影响的研究

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1、中图分类号堡至鲍UDC鱼!Q硕士学位论文学校代码!Q5三3密级公珏RBM5基因过表达抑制A549细胞增殖及其对DHXl5表达影响的研究(OVerexpressedRBM5inhib“stheprol：iferationofA549anda旬陀ctstheexpressionofDHXl5)作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：论文答辩日期圭!；：￡±9李念【临床医学老年医学湘雅医院何碧秀答辩委员会主席肚中南大学二O一三年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进

2、行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：日期：——年一月一目学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它

3、手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：——导师签名——日期：——年一月一日硕士学位论文摘要砌jM5基因过表达抑制A549细胞增殖及其对DHXl5表达影响的研究摘要目的：通过建立稳定转染RBM5基因的A549细胞系，观察RBM5基因过表达对A549细胞增殖以及D舣15表达的影响，为肺癌基因治疗提供理论依据。方法：①应用PCR技术从人睾丸cm漕中分两段扩增RBM5基因的开放阅读框(0RF)，将RBM5基

4、因克隆至真核表达载体pcDNA3．1(+)中；②将测序验证后的重组质粒pcDNA3．1(+)肥M5转染肺腺癌细胞A549，经G418筛选出RBM5基因过表达阳性细胞株并采用W色stemBlot检测对阳性细胞进行鉴定，流式细胞法检测RBM5基因过表达对肺腺癌细胞A549细胞周期的影响；③运用肼PCR技术检测RBM5基因过表达A549细胞株中剪接相关因子D取15的表达情况。结果：①成功构建出pcDNA3．1(+)／RBM5真核表达载体，建立了稳定转染RBM5基因的A549细胞系并筛选出RBM5基因过表

5、达阳性细胞株；②重组质粒pcDNA3．1(+)／RBM5转染组细胞较空白质粒pcDNA3．1(+)转染组细胞增殖缓慢，处于G1期细胞比例增大，S期细胞比例减小；③砌≥M5基因过表达A549细胞株中D舣15表达上调。结论：我们的研究显示①RBM5基因过表达可抑制肺腺癌细胞A549增殖，进一步验证了RBM5基因的肿瘤抑制作用；②RBM5基n硕士学位论文摘要因过表达可使D般15表达上调。关键词RBM5，过表达，转染，A549，肿瘤抑制，ⅨⅨ15分类号R563ⅡI硕士学位论文AbstractoVerexp

6、ressedRBM5inhibitstheprol诜rationofA549andAbstractaffectstheexpressionofDHXl5Objec晰e：ConstructeukaryoticeXpressionVectorofRBM5gene，thentransfcct也elungadenocarcmomacellA549andestdblishA549cell1i11es缸锄sfecteds讪lybyRBM5．Subsequently，weobseⅣedtIlee髓CtofoVe

7、reXpressedRBM5geneont11epr01if．erationofA549andt11ee冲ressionofDHXl5，wIlichwasexpectedtoproVideme血eo巧basisforgenemerapyoflur坞cancer．Melhods：Theopenreading]自狮e(ORF)ofRBM5genewasdiVidedmto铆osegmentsa11da玎叩lified丘omhumalltestiscDNAbyPCR．ThePCRproductswere

8、separatelyinsertedintopUCm—TVector，sequenced，menRBM5genewasclonedintoeuka巧oticexpressionVectorpcDNA3．1(+)．ThesequencedrecombinamplasmidpcDNA3．1(+)压国M5口跹sfe蹴dlungadenocarc如macellA549mediatedbyLipofectamine刑2000．W-escreenedoutoverexpressedI国M5by