cd133-2在儿童b系急性淋巴细胞性白血病发病中的作用及其机制初步研究

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1、硕士学位论文论文题目CD133-2在儿童B系急性淋巴细胞性白血病发病中的作用及其机制初步研究研究生姓名郭豆豆指导教师姓名赵文理专业名称儿科学研究方向小儿血液与肿瘤论文提交日期2013年3月CD133-2在儿童B系急性淋巴细胞性白血病发病中的作用及其机制初步研究中文摘要CD133-2在儿童B系急性淋巴细胞性白血病发病中的作用及其机制初步研究中文摘要目的：探究CD133-2在儿童B系急性淋巴细胞白血病（B-ALL）发病中的表达规律、CD133-2+白血病细胞的生物学特性和调控该群细胞的信号通路相关分子，为鉴定CD133-2是否为儿童B

2、-ALL白血病干细胞（LSC）的一项标志和阐明其调控的分子机制奠定实验基础。方法：1、流式细胞术检测42例初诊和复发的B-ALL患儿及10例对照组儿童的骨髓（BM）单个核细胞（MNCs）的CD133-1、CD133-2表达，并观察其与临床预后指标的相关性。2、选取6例CD133-2阳性表达(表达比例≥20%)的B-ALL患儿的新鲜骨髓标本，用磁珠分选（MACS）分离纯化出CD133-2+CD19+、CD133-2+CD19-、CD133-2-CD19+、CD133-2-CD19-四组亚群细胞，进行体外含血清悬浮培养，观察其增殖能力

3、，RT-PCR检测融合基因的表达。对其中3例磁珠分选的四组亚群细胞行甲基纤维素半固体培养，观察其集落形成能力。3、采用实时定量PCR技术对3例B-ALL患儿的CD133-2+CD19-、CD133-2+CD19+、CD133-2-CD19+、CD133-2-CD19-细胞亚群分别进行干细胞相关信号通路的基因表达筛查，并重点分析CD133-2+CD19-细胞群的相关信号通路分子。结果：1、流式细胞术结果显示：CD133-1、CD133-2在B-ALL中的表达水平明显高于正常对照骨髓中的表达水平，差异具有显著统计学意义（P<0.01）

4、；在B-ALL中，CD133-2的阳性表达率和表达水平均较CD133-1高，差异具有统计学意义（P＜0.05）；儿童B-ALL中CD133-2的表达与患儿发病时的性别、年龄、初诊白细胞数、危险等级、融合基因、细胞遗传学改变及完全缓解率等临床预后指标均无相关性。I中文摘要D133-2在儿童B系急性淋巴细胞性白血病发病中的作用及其机制初步研究2、体外悬浮培养结果显示：CD133-2+CD19-细胞群在培养中呈倍数增长趋势，在第6周时扩增了（117.9±72.51）倍（有10倍到226倍的扩增），而其他三组细胞未出现明显的增殖，差异具有

5、显著统计学意义（P<0.01）。一例初诊时E2A/PBX1融合基因阳性的患儿，其分选后的细胞亚群经悬浮培养4周后，RT-PCR检测到E2A/PBX1基因阳性仍存在于CD133-2+CD19-细胞群。3、体外半固体集落培养结果显示：CD133-2+CD19-细胞群在培养后第7天时混合集落（细胞数≥40）增长到（55±5.57）个，培养到第14天时达到（215±18.68）个；CD133-2+CD19+细胞在培养第7天时混合集落为（11±2.65）个，之后未再增多。而其他两组细胞培养2周均未出现集落。各群细胞差异具有明显的统计学意义（

6、P＜0.01）。4、实时定量PCR检测结果显示：CD133-2+CD19-细胞群为实验组与CD133-2+CD19+、CD133-2-CD19+、CD133-2-CD19-三组对照组细胞相比，基因表达差异主要分布于Wnt、TGFβ、FGF、Hedgehog（Hh）及Notch信号通路，主要涉及TGF-β、Wnt和FGF信号通路中的BMPR1B、SMAD6、SMAD9、RGMA、TCF7L2、FZD8及FGFR2等分子。结论：1、儿童B-ALL中CD133-2异常高表达，它与患儿初诊时的性别、年龄、初诊白细胞数、危险等级、融合基因、

7、细胞遗传学改变及完全缓解率等临床预后指标均无相关性。2、儿童B-ALL中CD133-2+CD19-细胞群体外培养显示，其具有长期增殖和多向分化能力，具备LSC生物学特性，可能是儿童B-ALL的LSC表型标志。3、儿童B-ALL的CD133-2+CD19-细胞群的调控可能与Wnt、TGFβ、FGF、Hedgehog（Hh）及Notch信号通路的异常密切相关，主要涉及TGF-β、Wnt和FGF信号通路中的BMPR1B、SMAD6、SMAD9、RGMA、TCF7L2、FZD8及FGFR2等分子。关键词：CD133-2；儿童B系急性淋巴细

8、胞白血病；预后；白血病干细胞；信号通路作者：郭豆豆指导教师：赵文理IICD133-2在儿童B系急性淋巴细胞性白血病发病中的作用及其机制初步研究英文摘要EffectofCD133-2onthePathogenesisofChildhoodB-line