维生素e琥珀酸酯诱导人胃癌细胞发生未折叠蛋白反应的研究

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1、维生素E琥珀酸酯诱导人胃癌细胞发生未折叠蛋白反应的研究黄晓莉吴坤赵莎莎山东大学齐鲁医院营养科哈尔滨医科大学营养与食品卫生教研室摘要：目的:探讨维生素E琥珀酸酯(VES)对人胃癌细胞未折叠蛋白反应的影响。方法:采用Westernblot法分析VES不同剂量(0、5、10和20ug/mL)处理人胃癌SGC-7901细胞24h和20ug/mLVES处理SGC-7901细胞不同时间(0、6、12、18和24h)对内质网膜上的跨膜蛋APKR样内质网蛋白激酶(PERK)磷酸化和活化转录因子6(ATF6)活化的影响;釆用RT-PCR法检测VES不同剂量(0、5、10和20ug/m

2、L)处理SGC-7901细胞24h和20ug/mLVES处理SGC-7901细胞不同时间(0、3、6、9、12、15、18和24h)对活化转录因子4(ATF4)mRNA表达和X盒结合蛋白1(XBP1)mRNA剪切的影响。结果:在翻译水平上VES对磷酸化PERK的诱导作用具有时间依赖关系，与阴性对照组比较，10ug/mLVES的诱导作用最强(P<0.05);在翻译水平上VES对ATF6活化片段的诱导作用具有时间依赖关系和剂量依赖关系;在转录水平上，随着作用时间的延长，VES对ATF4mRNA的诱导作用也不断增强，18h达到高峰，而XBPlmRNA从VES作用6h即开始

3、出现剪切。结论:VES诱导人胃癌SGC-7901细胞发生内质网应激过程中，未折叠蛋口反应相关信号分子被活化。关键词：未折叠蛋白反应;维牛素E琥珀酸酯;胃癌细胞;内质网应激;作者简介：黄晓莉，E-ma订:hxl0251010@163.com收稿日期：2016-09-20基金：国家自然科学基金资助项FI(81402663)VitaminEsuccinateinducedunfoldedproteinresponseofhumangastriecancerSGC-7901cellsHUANGXiaoliWUKunZHAOShashaDepartmentofNutritio

4、n,QiluHospitalofShandongUniversity;DepartmentofNutritionandFoodHygiene,HarbinMedicalUniversity;Abstract：OBJECTIVE:ToinvestigatetheeffectofvitaminEsuccinate(VES)onunfoldedproteinresponse(UPR)inhumangastriecancerSGC-7901cells.METHODS:SGC-7901cellsweretreatedwithVESat5,10and20pg/mLandwith

5、tunicamycin(TM)at3Ug/mLfor24horat20ug/mLforupto24h.RNA-dependentproteinkinase(PKR)-likeERkinase(PERK)andactivatingtranscriptionfactor6(ATF6)wereevaluatedusingWesternblotting.X-boxbindingprotein1(XBP1)andactivatingtranscriptionfactor4(ATF4)wereevaluatedusingRT-PCR.RESULTS:VESinducedthep

6、hosphorylationofPERKinatime-dependentmannerandreachedthetoplevelat10Pg/mL.Inaddition,VESinducedthegenerationofp50ATF6inSGC-7901cellsinadose-andtime-dependentmanner.Likethepositivccontrol,VEStreatmentat20ug/mLinducedthesplicedformofXBP1from6hupto24h.Meanwhile,ATF4mRNAwasalsoup-regulated

7、incellsexposedtoVESinatime-dependentmannerandreachedthetoplevelat18h.CONCLUSION:UPRpathwaysmaybeactivatedbyVESinhumangeistriecancerSGC-7901cells・Keyword：unfoldedproteinresponse;vitaminEsliceinate;gastriccancerSGC-7901cells;endoplasmicreticulumstress;Received：2016-09-20维生素E琥珀酸酯(vitami