非折叠蛋白质反应研究

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1、江西农业大学学报2012，34(1):165－169http://xuebao．jxau．edu．cnActaAgriculturaeUniversitatisJiangxiensisE－mail:ndxb7775@sina．com丙型肝炎病毒NS4B蛋白调控Hep3B细胞非折叠蛋白质反应研究*张艳妮，张庆华，陈瑶，刘好桔，刘志文，孔令保(江西农业大学生物科学与工程学院，江西南昌330045)摘要:研究表达的丙型肝炎病毒(HCV)NS4B对Hep3B细胞非折叠蛋白质反应的影响。NS4B重组真核表达质粒pcDNA3．1(－)NS4B通过脂质体转染He

2、p3B细胞，G418筛选和Westernblot鉴定稳定转染细胞;RT－PCR检测稳定转染细胞内XBP1mRNA剪接，Westernblot鉴定ATF6蛋白切割，荧光素酶试验检测稳定转染细胞内GRP78和XBP1启动子活性。G418筛选和WesternBlot鉴定证实获得稳定表达NS4B的Hep3B细胞;在该细胞内，XBP1mRNA剪接、ATF6切割、XBP1和Grp78启动子激活均被检测到。NS4B在Hep3B的稳定表达诱导了非折叠蛋白质反应。关键词:丙型肝炎病毒;NS4B;Hep3B;非折叠蛋白质反应中图分类号:R373文献标志码:A文章编号:

3、1000－2286(2012)01－0165－05RegulationofUnfoldedProteinResponseinHep3BCellsbyHCVNS4BZHANGYan-ni，ZHANGQing-hua，CHENGYao，*LIUHao-ju，LIUZhi-wen，KONGLing-bao(CollegeofBioscienceandEngineering，JAU，Nanchang330045，China)Abstract:TostudytheeffectofhepatitisCvirusNS4Bonunfoldedproteinresp

4、onseinHep3Bcells．TherecombinantvectorpcDNA3．1(－)NS4BwithNS4BgenewastransfectedtoHep3BcellsusingLipo-fectamine2000．StablytransfectedcellswereselectedbyG418andthenconfirmedbyWesternblotanalysis;XBP1mRNAsplicing，ATF6cleavage，GRP78andXBP1promoteractivationwereanalyzedinstablytrans

5、-fectedHep3BcellsusingRT－PCR，Westernblotorluciferaseassays．G418seclectionandWesternblotdemonstratedthatHep3BcellsstablyexpressingNS4Bwereobtainedsuccessfully;XBP1mRNAsplicing，ATF6cleavage，GRP78andXBP1promoteractivationwereobservedinHep3BcellsstablyexpressingNS4B．Stableexpressi

6、onofNS4BinHep3Bcellsinducesunfoldedproteinresponse．Keywords:HCV;NS4B;Hep3B;unfoldedproteinresponse内质网是真核细胞中一种重要的亚细胞器。多种生理或病理条件，如病原体感染，内质网钙的消耗，膜蛋白过量表达等均能引起从内质网到胞浆和胞核的信号传导途径即内质网应激反应(ERstressresponse)。内质网应激可以激活三条信号通路:(1)非折叠蛋白质反应(unfoldedproteinresponse，收稿日期:2011－09－08修回日期:2011－11

7、－21基金项目:江西省科技支撑计划重点项目(2009BNA09400)、江西省自然科学基金项目(2010GZY0059)和江西农业大学校基金项目(2950)作者简介:张艳妮(1983—)，女，研究生，主要从事HCV研究，E－mail:280960911@qq．com;*通讯作者:孔令保，副教授，博士，E－mail:lingbaok@hotmail．com。·166·江西农业大学学报第34卷UPR);(2)内质网超负荷反应(ER－overloadresponse);(3)固醇调节级联反应(sterolresponsepath-way)。位于内质网的三

8、种跨膜蛋白IRE1(inositol－requiringenzyme1α)、PERK(pancreaticERkinase